油菜花粉多糖的分離、純化、結(jié)構(gòu)鑒定及抗氧化活性的研究.pdf

1、近年來(lái)，花粉作為優(yōu)良的全營(yíng)養(yǎng)食物被全世界廣泛關(guān)注，掀起一股“花粉研究熱”。多年來(lái)我國(guó)花粉的基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究己全面深入地開展，并取得多方面的可喜成果，有些方面己進(jìn)入國(guó)際研究的前沿。 油菜花粉是中國(guó)產(chǎn)量最大的花粉，充分利用我國(guó)油菜花粉資源，對(duì)油菜花粉進(jìn)行深入系統(tǒng)研究，使這一豐富資源的開發(fā)和利用提高到一個(gè)新的水平，將會(huì)產(chǎn)生極大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。油菜花粉多糖具有抗腫瘤、增強(qiáng)免疫等功能，然而目前報(bào)道的油菜花粉多糖的最高提取率僅達(dá) 1.4

2、50％，為了更好地提高油菜花粉多糖的提取率，本論文采用溫差-機(jī)械法、溫差-超聲波法和超微粉碎法三種方法對(duì)油菜花粉進(jìn)行破壁，以期找到最佳的破壁方法。并在系統(tǒng)研究了油菜花粉多糖的提取、分離純化、理化性質(zhì)以及初級(jí)結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，對(duì)其抗氧化的活性功能進(jìn)行了評(píng)價(jià)，為今后油菜花粉多糖的研究與開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。本論文主要研究?jī)?nèi)容與結(jié)論如下： 1．測(cè)定了油菜花粉中蛋白質(zhì)、脂肪、黃酮、以及幾種金屬元素如Cu、Mg、Fe、Ca、Zn的含量，為油菜花粉的

3、開發(fā)利用提供了科學(xué)依據(jù)。測(cè)定結(jié)果顯示油菜花粉中蛋白和脂肪含量較高，所測(cè)的幾種金屬元素也較豐富。 2．采用溫差-機(jī)械法、溫差-超聲波法和超微粉碎法分別對(duì)油菜花粉進(jìn)行破壁，發(fā)現(xiàn)溫差-機(jī)械法和溫差-超聲波法破壁效果遠(yuǎn)不如超微粉碎破壁，超微粉碎破壁率可高達(dá)99％以上。 3．以葡萄糖為對(duì)照，優(yōu)選苯酚-硫酸法測(cè)定油菜花粉多糖含量的顯色條件。最佳的顯色條件為：取待測(cè)油菜花粉多糖2 mL，加入濃度為5％苯酚1 mL，迅速滴加濃硫酸5.0

4、 mL，搖勻后于室溫放置20 min，在482 nm處測(cè)定吸光度。 4．對(duì)油菜花粉多糖的水提工藝進(jìn)行了研究，探討提取溫度、提取時(shí)間、料液比和提取次數(shù)對(duì)多糖提取率的影響。在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，通過(guò)正交試驗(yàn)確定最佳提取工藝條件。結(jié)果表明提取溫度對(duì)多糖提取率的影響最大，其次為提取時(shí)間、次數(shù)，料液比的影響最小。油菜花粉多糖提取的最優(yōu)條件為：提取溫度為70℃，提取時(shí)間為4 h，提取次數(shù)2次，料液比為1:8，此時(shí)多糖提取率達(dá)4.48％。

5、 5．比較Sevag法和TCA法對(duì)油菜花粉多糖脫蛋白的效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明TCA法對(duì)油菜花粉多糖中蛋白的脫除率遠(yuǎn)高于Sevag法，并且多糖的損失率也低于Sevag法。 6．用DEAE-纖維素對(duì)油菜花粉精制多糖進(jìn)行初步分離，主要得到中性多糖D<,1>和酸性多糖D<,3>兩個(gè)組分。再用Sephacryl S-200柱層析分別對(duì)多糖D<,1>和D<,3>進(jìn)一步分離純化得到中性多糖D<,11>和酸性多糖D<,31>，用Sephacry

6、l S-300柱層析和HPLC法分別鑒定其純度，結(jié)果顯示只有D<,11>組分為純度很高的均一多糖。采用凝膠過(guò)濾法測(cè)定多糖D<,11>的分子量為80271，通過(guò)GC分析多糖D<,11>與D<,31>的單糖組成，結(jié)果表明它們均至少由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖六種單糖組成。UV檢測(cè)顯示油菜花粉多糖D<,11>于280 nm處未見(jiàn)有核酸和蛋白特征吸收峰，經(jīng)IR檢測(cè)證實(shí)多糖D<,11>與D<,31>具有多糖類物質(zhì)的特征吸收峰。