葡萄糖神經酰胺合成酶基因在人耐多柔比星乳腺癌細胞株MCF-7-ADR中的表達及意義.pdf

1、目的： 研究葡萄糖神經酰胺合成酶(GCS)基因在人乳腺癌細胞株MCF-7和人耐多柔比星乳腺癌細胞株MCF-7/ADR中的表達及意義；探討GCS與P-糖蛋白表達水平以及功能之間的關系。 方法： 采用四甲基偶氮唑鹽(MTD法檢測多柔比星對MCF-7/ADR、MCF-7的抑制率和IC50，用濃度為51amol/L、10μmol/L、20μmol/L的GCS抑制劑D，L-threo-1-phenyl-2-decanoyl

2、-amino-3-morpholino-1-propanol(PDMP)預處理MCF-7/ADR 24h、48h后檢測多柔比星對其抑制率和IC50；運用流式細胞檢測術(FCM)檢測MCF-7及PDMP處理前后MCF-7/ADR細胞中P-gP、GCS蛋白的表達水平；運用FCM檢測不同濃度的PDMP預處理MCF-7/ADR 48h后，細胞內多柔比星的潴留量并拍攝熒光照片；應用實時熒光定量逆轉錄多聚酶鏈反應(Real timeRT-PCR)檢

3、測MCF-7以及PDMP作用前后MCF-7/ADR細胞中GCSmRNA的表達水平。 結果： MCF-7/ADR對MCF-7的耐藥倍數為22.69倍，PDMP預處理后多柔比星對MCF-7/ADR的抑制率升高，IC50下降(P<0.05)；MCF-7/ADR中GCS和P-gp的表達水平均高于MCF-7(P<0.001)，PDMP使MCF-7/ADR中GCS蛋白和mRNA表水平均下降(P<0.05)，對P-gP蛋白表達水平無明

4、顯影響(P>0.05)。FCM定量檢測及熒光照片定性檢測顯示，不同濃度的PDMP預處理MCF-7/ADR 48h后，可使多柔比星在其內潴留量不同程度增多。 結論： GCS可能參與惡性腫瘤耐藥的發(fā)生過程，并在MCF-7/ADR多藥耐藥中起重要作用，在多藥耐藥表型中GCS與P-gp有一定關系；PDMP不影響P-gp蛋白的表達水平，但能影響其功能，PDMP能比較有效的逆轉人耐多柔比星乳腺癌細胞株MCF-7/ADR對多柔比星的耐