骨橋蛋白和核轉(zhuǎn)錄因子在慢性環(huán)孢素A腎毒性大鼠腎組織中的作用.pdf

1、目的：探討炎性介質(zhì)骨橋蛋白(Osteopontin，OPN)的表達(dá)和核轉(zhuǎn)錄因子在大鼠慢性環(huán)孢素A(CsA)腎毒性中的作用。
　　方法：雄性Sprague-Dawley大鼠喂食低鹽飼料(0.05％鈉鹽)下分為兩組，正常對照組給予皮下注射橄欖油(1ml/kg/d)；慢性CsA腎毒性組給予皮下注射環(huán)孢素A(15mg/kg/d)4周。通過三色染色觀察腎小管間質(zhì)纖維化程度和免疫組化觀察ED-1陽性細(xì)胞；采用RNA印跡、免疫組織化學(xué)染色方法檢

2、測OPN在mRNA和蛋白水平的表達(dá)；用凝膠電泳遷移率實(shí)驗(yàn)(Electrophoretic mobility shift assay，EMSA)分析法和免疫印跡法測定核轉(zhuǎn)錄因子(NF-кB和 AP-1)的結(jié)合活性和IкB蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：與對照組相比，毒性組大鼠表現(xiàn)為腎小管間質(zhì)帶狀纖維化[(38.9±3.3)%vs.(0.0±0.0)%，P<0.01]和大量ED-1陽性細(xì)胞浸潤[(89±9)%vs.(7±2)%，P<0.01]

3、。與對照組相比，毒性組大鼠 OPN mRNA和蛋白的表達(dá)明顯增加[(729±37)% vs.(103±4)%，P<0.01]，分布于腎小管上皮細(xì)胞，其主要位于腎小管間質(zhì)損傷部位。毒性組核轉(zhuǎn)錄因子NF-кB(218±19 vs.116±15，P<0.01)和AP-1(735±225 vs.101±4，P<0.01)結(jié)合活性顯著增加，而IкB蛋白的表達(dá)減少(9±7 vs.105±7，P<0.01)。直線相關(guān)分析示OPN mRNA的表達(dá)與腎小