Cathepsin L通過(guò)調(diào)控EMT影響腫瘤細(xì)胞的侵襲遷移能力.pdf

1、目的：本研究旨在探討經(jīng)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）刺激后，溶酶體組織蛋白酶L(Cathepsin L)通過(guò)調(diào)控EMT，影響上皮源性腫瘤細(xì)胞的侵襲遷移能力。
　　方法：構(gòu)建穩(wěn)定低表達(dá)Cathepsin L的A549和MCF-7細(xì)胞株，用適當(dāng)劑量的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）處理細(xì)胞，采用劃痕法、Transwell小室法分別檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的遷移、侵襲能力；鬼筆環(huán)肽染色的方法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞骨架變化；Western blot及免疫熒光檢測(cè)

2、EMT相關(guān)標(biāo)志蛋白E-cadherin、N-cadherin的變化；RT-PCR和western blot檢測(cè)EMT上游信號(hào)通路的相關(guān)分子的表達(dá)；建立裸小鼠皮下移植瘤模型，觀察Cathepsin L穩(wěn)定低表達(dá)的細(xì)胞株在體內(nèi)的成瘤能力，運(yùn)用免疫組化分析法檢測(cè)各組移植瘤中E-cadherin、N-cadherin的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：劃痕、Transwell小室及鬼筆環(huán)肽染色結(jié)果顯示，抑制Cathepsin L的表達(dá)后，TGF-β誘

3、導(dǎo)引起的細(xì)胞遷移、侵襲及運(yùn)動(dòng)能力的增強(qiáng)受到了一定程度的抑制。免疫熒光和western blot結(jié)果顯示，用Cathepsin L shRNA靶向抑制Cathepsin L的表達(dá)能顯著抑制由TGF-β誘導(dǎo)所引起的EMT相關(guān)標(biāo)志蛋白E-cadherin表達(dá)的下調(diào)和N-cadherin表達(dá)的上調(diào)。RT-PCR和western blot結(jié)果顯示，Cathepsin L對(duì)EMT的調(diào)節(jié)與其上游信號(hào)分子Snail,p-Akt,Wnt-5a等的表達(dá)水平

4、有關(guān)。在裸小鼠皮下移植瘤模型中，用Cathepsin L穩(wěn)定低表達(dá)的細(xì)胞株接種的移植瘤生長(zhǎng)能力明顯低于正常腫瘤細(xì)胞株。免疫組化分析顯示，相較于正常腫瘤細(xì)胞株，Cathepsin L穩(wěn)定低表達(dá)的細(xì)胞株的移植瘤中Cathepsin L的表達(dá)減少，E-cadherin的表達(dá)增加，而N-cadherin的表達(dá)則減少，并且凋亡能力更強(qiáng)。
　　結(jié)論：TGF-β能誘導(dǎo)Cathepsin L的表達(dá)，并與其對(duì)腫瘤細(xì)胞的遷移、侵襲誘導(dǎo)作用相關(guān)，其可能