骨髓基質(zhì)細(xì)胞與bcl-2基因治療大鼠腦梗死后NGF表達(dá)的研究.pdf

1、骨髓基質(zhì)細(xì)胞與bcl-2基因治療大鼠 腦梗死后NGF表達(dá)的研究 缺血性腦血管病越來越嚴(yán)重地威脅到人類健康和生活，已經(jīng)成為當(dāng)今第三大致死疾病及首位致殘病因，但仍缺乏有效治療手段。神經(jīng)細(xì)胞損傷后組織修復(fù)和功能重建一直是神經(jīng)科學(xué)者研究的重要課題。 骨髓基質(zhì)細(xì)胞(bone marrow stromM cells，BMSCs)是神經(jīng)移植的來源，BMSCs作為神經(jīng)細(xì)胞，可以分泌多種營養(yǎng)因子，如NGF、GDNF。許多實(shí)驗(yàn)證明B

2、MSCs對(duì)神經(jīng)細(xì)胞損傷后組織修復(fù)和功能重建有重要作用。Bcl-2基因是細(xì)胞凋亡過程中最主要的調(diào)控基因之一，它亦能夠改善大鼠神經(jīng)功能。神經(jīng)生長因子是神經(jīng)系統(tǒng)最重要生物活性分子之一，神經(jīng)生長因子有利于受損組織的修復(fù)，在不同原因引起腦損傷的情況下，均可導(dǎo)致NGF表達(dá)增加。 Yi Li，Chen等聯(lián)合應(yīng)用骨髓基質(zhì)細(xì)胞與具有抗凋亡作用Caspase抑制劑z-VAD來治療大鼠局灶性腦梗死，證明聯(lián)合治療能提高BMSCs生存率和改善神經(jīng)功能。我

3、們可以聯(lián)合應(yīng)用骨髓基質(zhì)細(xì)胞與抗凋亡基因bcl-2來治療大鼠局灶性腦梗死，觀察兩者是否可以同樣產(chǎn)生協(xié)同作用，同時(shí)檢測具有神經(jīng)保護(hù)作用的神經(jīng)生長因子(NGF)的表達(dá)是否增加。實(shí)驗(yàn)材料與方法 40只成年雄性Wistar大鼠，按隨機(jī)原則分為4組：空白對(duì)照組，bcl-2組，BMSCs組和BMSCs+bcl-2組，每組10只。每組再按照缺血/再灌注后3天、14天，分為2個(gè)亞組，每組5只。所有大鼠均制成大腦中動(dòng)脈模型，2小時(shí)后再灌注。Bcl

4、-2組及BMSCs+bcl-2組大鼠于再灌注3小時(shí)后，經(jīng)右頸總動(dòng)脈緩慢注射pLXSN-bcl-2質(zhì)粒。BMSCs組和BMSCs+bcl-2組大鼠于再灌注24小時(shí)后，經(jīng)尾靜脈注射Brdu標(biāo)記的BMSCs。注射成功大鼠用免疫組化和TUNEL法測定Bax蛋白、NGF表達(dá)，BMSCs分布及凋亡細(xì)胞分布。 1．方法：每一亞組的大鼠再次麻醉，麻醉后心臟灌流。灌流后取腦，常規(guī)固定，石蠟包埋，連續(xù)冠狀切片(厚6微米)備用。每個(gè)切片均染色，應(yīng)用S

5、ABC免疫組化法觀察Bax蛋白、NGF表達(dá)，BMSCs分布及凋亡細(xì)胞分布。 2．結(jié)果判定：每個(gè)標(biāo)本取兩張切片，分別在高倍鏡(400×)下隨機(jī)觀察紋狀體區(qū)不重疊的8個(gè)視野，顯微圖像分析系統(tǒng)采集圖象，分析陽性細(xì)胞面積百分比(A[％])。 3．各組數(shù)據(jù)均以X±s表示，組間比較采用SPSS10.0軟件進(jìn)行方差分析及t檢驗(yàn)，認(rèn)為P<0.05差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

6、 1．BMSCs+bcl-2組Bax蛋白表達(dá)在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)較BMSCs組、bcl-2組及空白對(duì)照組均明顯減小(P<0.05)。BMSCs及bcl-2組在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)較空白對(duì)照組均明顯減小(P<0.05)。 2．BMSCs+bcl-2組NGF表達(dá)水平在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)較BMSCs組、bcl-2組及空白對(duì)照組明顯增加(P<0.05)。BMSCs及bcl-2組在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)較空白對(duì)照組明顯增加(P<0.05)。 3．BMSCs+bc

7、l-2組腦內(nèi)細(xì)胞凋亡在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)較BMSCs組、bcl-2組及空白對(duì)照組明顯減小(P<0.05)。BMSCs組、bcl-2組腦內(nèi)細(xì)胞凋亡在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)較空白對(duì)照組明顯減小(P<0.05)。 4．在梗死半球可見大量的Brdu陽性的BMSCs細(xì)胞，主要存在于梗死灶周邊，對(duì)側(cè)半球也可見少量Brdu陽性細(xì)胞。 在腦缺血/再灌注時(shí)，聯(lián)合應(yīng)用骨髓基質(zhì)細(xì)胞與bcl-2基因治療大鼠局灶性腦梗死，可明顯改善大鼠神經(jīng)功能，提高NGF的