SUD對(duì)人食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株Te-1增殖和凋亡的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、近年來(lái)食管癌的死亡率逐漸增高，在世界惡性腫瘤死亡率中也位居前列，而我國(guó)正是食管癌的高發(fā)地區(qū)。目前惡性腫瘤的治療方法有手術(shù)、放療、化學(xué)治療和免疫治療等手段，以化學(xué)治療為主的綜合治療在其中占有十分重要的地位。本實(shí)驗(yàn)選取人食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株TE-1作為研究對(duì)象來(lái)考察全合成的新型小分子化合物N-[4-（4，6二甲基-2-嘧啶氧基）-3-甲基苯基]-N-[2-（二甲氨基）]苯甲酰脲(SUD)在細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞周期和凋亡方面的作用，并對(duì)其凋亡相關(guān)蛋

2、白進(jìn)行了研究。實(shí)驗(yàn)共分為兩部分:
　　 第一部分:SUD對(duì)人食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株TE-1生長(zhǎng)的抑制作用
　　 目的:研究SUD對(duì)食管細(xì)胞癌細(xì)胞TE-1生長(zhǎng)的抑制作用。
　　 方法:此部分實(shí)驗(yàn)中采用MTT比色法、生長(zhǎng)曲線實(shí)驗(yàn)、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SUD對(duì)食管細(xì)胞癌細(xì)胞TE-1生長(zhǎng)的影響。采用光學(xué)顯微鏡觀察TE-1細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)。
　　 結(jié)果:(1)MTT實(shí)驗(yàn)顯示SUD具有抑制腫瘤細(xì)[1]胞的生長(zhǎng)的能力，且這

3、種作用呈時(shí)間依賴性與濃度依賴性。SUD10-4mol/L濃度組與陽(yáng)性對(duì)照藥比較具有更強(qiáng)的抑制作用(P＜0.01)。(2)生長(zhǎng)曲線實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，SUD能對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)起到抑制作用。(3)平板克隆實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示14天后TE-1細(xì)胞有18.00％的克隆形成率，SUD10-4mol/L，10-5mol/L和10-6mol/L藥物處理組克隆形成率分別降至0.38％，5.00％和7.22％，與對(duì)照組比較具有極顯著性差異(P＜0.01)。(4)普通光

4、鏡下觀察到SUD處理組TE-1細(xì)胞都出現(xiàn)了細(xì)胞間連接的消失和膜不對(duì)稱性，以及細(xì)胞皺縮等現(xiàn)象。
　　 結(jié)論:(1)SUD可以對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生時(shí)間依賴和濃度依賴性抑制，高濃度組與陽(yáng)性對(duì)照藥比較具有顯著性差異。(2)SUD對(duì)TE-1細(xì)胞克隆形成可產(chǎn)生抑制作用。(3)SUD能引起TE-1形態(tài)的改變。
　　 第二部分:SUD對(duì)人食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株TE-1細(xì)胞周期和凋亡的影響
　　 目的:研究SUD對(duì)TE-1細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的

5、影響及相關(guān)機(jī)制。
　　 方法:采用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)TE-1的細(xì)胞周期和凋亡進(jìn)行分析。采用DAP(I)染色的方法對(duì)藥物誘導(dǎo)TE-1凋亡現(xiàn)象進(jìn)行觀察。使用AnnexinV-PI雙染流式分析術(shù)對(duì)細(xì)胞的早期凋亡進(jìn)行分析。westernblot檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白對(duì)SUD的凋亡機(jī)制進(jìn)行研究。
　　 結(jié)果:(1)SUD10-4mol/L引起TE-1細(xì)胞的S期數(shù)量增多與相應(yīng)的G1期細(xì)胞數(shù)量減少。SUD10-5mol/L和10-6mol/L藥物

6、處理組TE-1細(xì)胞的G1期數(shù)量增多，S期數(shù)量的減少。10-6mol/L藥物處理組G2/M細(xì)胞數(shù)量增多。SUD可引起TE-1細(xì)胞的凋亡，與對(duì)照組相比具有顯著性差異(P＜0.01)。(2)采用DAPI染色方法可以看到細(xì)胞的核固縮，染色質(zhì)凝集等現(xiàn)象，并可觀測(cè)到凋亡小體。給藥作用48h后，與對(duì)照組相比中高濃度組光鏡下可以觀察到更多凋亡小體和典型的形態(tài)學(xué)變化。(3)對(duì)TE-1細(xì)胞加藥處理48h后，高、中、低濃度SUD分別誘發(fā)了0.348±0.01

7、3，0.188±0.006和0.084±0.005的早期凋亡，均顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)。(4)SUD可以誘導(dǎo)凋亡抑制蛋白Bcl-2表達(dá)水平的明顯下調(diào)，可引起凋亡促進(jìn)蛋白Bax和p53的表達(dá)水平的上調(diào)。隨著濃度的升高的凋亡促進(jìn)蛋白與凋亡抑制蛋白的比值(Bax/Bcl-2)增加。藥物作用48h后細(xì)胞中caspase-3、caspase-9和PARP的表達(dá)量減少，相應(yīng)活化的cleavedcaspase-3、cleavedcaspase

8、-9和cleavedPARP片段的表達(dá)上調(diào)。
　　 結(jié)論:(1)SUD10-4mol/L組使TE-1的S期的細(xì)胞增多，SUD10-5mol/L和(10-6)mol/L組使TE-1的G1期細(xì)胞增多，10-6mol/L組使G2/M期細(xì)胞增多。我們初步推測(cè)可能是SUD在低濃度時(shí)首先抑制細(xì)胞暫不增殖進(jìn)入G1期后不立即轉(zhuǎn)入S期。(2)SUD可以誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞TE-1發(fā)生不同程度的凋亡。(3)SUD對(duì)腫瘤細(xì)胞TE-1凋亡作用機(jī)制可能是通過(guò)上調(diào)