IL-33在慢性阻塞性肺疾病發(fā)病機制中的作用研究.pdf

1、第一部分 IL-33及其受體在慢性阻塞性肺疾病患者中的表達變化
　　目的：慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一種肺部慢性炎癥性疾病,其特征是炎癥細胞活化和炎癥介質(zhì)的釋放。白細胞介素-33(IL-33)是具有免疫調(diào)節(jié)作用的白細胞介素-1（IL-1）家族新成員，在各種炎癥和免疫疾病中起著重要作用,但IL-33是否參與COPD發(fā)病機制仍不清楚。本部分實驗目的在于探討IL-33及其受體ST2和IL-1受體輔助蛋白（IL-1 RAcP）在COP

2、D患者中的表達水平。
　　方法：應用酶聯(lián)免疫吸附法檢測112例COPD患者和115例對照組血漿IL-33、ST2、IL-1 RAcP的濃度，并用流式細胞術(shù)檢測外周血細胞IL-33表達情況；將12例因肺部非腫瘤性疾病行肺葉切除術(shù)患者按肺功能情況分為COPD組（6例）和對照組（6例），用免疫熒光染色法檢測氣道IL-33的表達情況，并用Western Blot方法對氣道組織中IL-33蛋白水平進行分析。
　　結(jié)果：與對照組相比，C

3、OPD組血漿IL-33、ST2、IL-1RAcP濃度均升高，外周血中IL-33主要由淋巴細胞表達，COPD組IL-33陽性淋巴細胞比例明顯高于對照組，中性粒細胞中IL-33陽性比例較低，兩組無顯著性差異。IL-33在肺內(nèi)主要表達在氣道上皮細胞，COPD組平均熒光強度高于對照組，且COPD組氣道組織中IL-33蛋白水平較對照組明顯升高。
　　結(jié)論：IL-33、ST2和IL-1Racp在COPD患者中的表達均升高，且IL-33主要來源

4、于外周血淋巴細胞和氣道上皮細胞。
　　第二部分香煙煙霧誘導慢性阻塞性肺疾病中IL-33的表達和釋放
　　目的：吸煙是COPD發(fā)病的重要危險因素，香煙中的有害成分刺激機體產(chǎn)生多種炎癥介質(zhì)，參與COPD的發(fā)生和進展，香煙煙霧是否可以直接誘導IL-33的表達尚不清楚，因此，研究香煙煙霧對IL-33表達和釋放的影響是本部分實驗的目的。
　　方法：12只小鼠隨機被分為對照組和熏煙組；熏煙組小鼠分別暴露于香煙煙霧中8個月，用HE染

5、色法觀察肺組織形態(tài)學改變，Real-time PCR法檢測小鼠PBMCs中IL-33和ST2的轉(zhuǎn)錄，ELISA方法檢測小鼠血漿IL-33和ST2的釋放，Western Blot法檢測小鼠氣道中IL-33的蛋白表達量；培養(yǎng)HBE細胞，分成4組：對照組（CM組），CSE組，LPS組，CSE+LPS組；Western Blot法檢測各組IL-33的表達水平，ELISA方法檢測細胞培養(yǎng)上清中IL-33水平，Annexin V-FITC/PI雙染

6、法流式細胞術(shù)檢測細胞的損傷和凋亡。
　　結(jié)果：與對照組相比，熏煙組小鼠肺泡間隔破壞明顯；熏煙組小鼠PBMCs的IL-33和ST2基因轉(zhuǎn)錄水平和血漿IL-33和ST2濃度較對照組升高，熏煙組小鼠氣道中IL-33的蛋白表達也明顯升高；另外，體外細胞實驗證實CSE和LPS能夠刺激HBEs IL-33表達增加，細胞培養(yǎng)上清中IL-33的濃度也呈現(xiàn)相應的增高趨勢。
　　結(jié)論：吸煙可以刺激IL-33在機體內(nèi)的表達和釋放，在體外條件下，C

7、SE和LPS能夠促HBE中IL-33表達和釋放。
　　第三部分 TLR4在香煙煙霧致IL-33表達增高中的作用
　　目的：探討TLR4是否參與調(diào)節(jié)香煙煙霧致IL-33的表達，研究TLR4基因單核苷酸多態(tài)性與吸煙者IL-33的差異表達的關系。
　　方法：24只小鼠隨機分為4組：對照組，TAK242腹腔注射組，香煙煙霧暴露組，TAK242腹腔注射+香煙煙霧暴露組，每組6只； Western blot法檢測TLR4和IL-3

8、3在小鼠氣道中的蛋白表達量，Real-time PCR法檢測小鼠PBMCs TLR4和IL-33基因的轉(zhuǎn)錄水平；培養(yǎng)HBE細胞，分成6組：對照組，TAK242組，CSE組，CSE+TAK242組，LPS組，LPS+TAK242組，Real-time PCR法和Western Blot法檢測各組IL-33和TLR4的基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達。測序法檢測20例吸煙健康者和20例吸煙COPD患者中TLR4基因rs4986790、rs4986791和

9、rs11536889位點多態(tài)性。
　　結(jié)果：動物實驗中，與對照組相比，小鼠氣道組織中TIL4和IL-33的蛋白表達水平在S組顯著升高，小鼠PBMCs TLR4和IL-33的基因轉(zhuǎn)錄水平在S組也明顯升高，且TAK242可以明顯抑制香煙煙霧暴露小鼠氣道和PBMCs中IL-33的表達。體外細胞培養(yǎng)實驗中，與對照組比較，CSE可以誘導HBEs TLR4mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白表達水平增加，且TAK242可以明顯抑制CSE和LPS誘導的IL-33

10、表達。TLR4基因單核苷酸多態(tài)性檢測結(jié)果顯示：在所有研究對象中，rs4986790位點和rs4986791位點均未發(fā)現(xiàn)等位基因，健康吸煙者組和COPD患者組之間 rs11536889位點等位基因的頻率無顯著性差異，兩組中來自rs11536889位點GG基因型的受試者與來自CG基因型的受試者血漿IL-33蛋白水平比較均未見顯著性差異。
　　結(jié)論：TLR4參與香煙煙霧誘導的IL-33表達調(diào)控，TLR4基因單核苷酸多態(tài)性可能與吸煙者IL