4株海洋真菌和2種海洋動物次級代謝產物及其抗腫瘤活性研究.pdf

1、海洋生物生存環(huán)境特殊，其次級代謝產物化學結構新穎、種類繁多，是新活性先導化合物的重要來源。為了尋找抗腫瘤、抗氧化活性先導化合物，本論文采用活性追蹤的方法開展了4株海洋微生物和2種海洋底棲動物活性次級代謝產物的研究工作。內容包括：不同培養(yǎng)條件下微生物次級代謝產物的比較和目標菌株的選擇：活性成分的追蹤分離：單體化合物的結構解析；單體化合物的活性初步評價。 在對本實驗室已研究過次級代謝產物的20株海洋活性真菌進行培養(yǎng)條件改變摸索研究，

2、發(fā)現(xiàn)了2株真菌的粗提物仍然保持抗腫瘤活性，但TLC薄層色譜和高壓液相指紋圖譜顯示其次級代謝產物與原菌株的明顯不同，發(fā)現(xiàn)兩株菌的代謝產物中主要成分極性明顯增大以及紫外吸收明顯發(fā)生改變，于是決定將其作為本論文的主要研究對象。此外，本論文還對2種具有抗腫瘤活性的海洋底棲動物和2株采自韓國沿海具有抗氧化活性的海洋真菌次級代謝產物進行了研究。 對4株目標活性菌進行了大量發(fā)酵，對2種海洋動物進行了勻漿和浸提。并對發(fā)酵產物和浸提物運用萃取，薄

3、層層析，正相、反相硅膠柱層析，LH-20凝膠柱層析，反相高壓液相等化學的分離純化手段進行活性追蹤分離，從土壤青霉菌(Penicillium terrestre)的代謝產物中分離得到29個化合物單體(1-29)；從匍匐曲霉(Aspergillus repens)中分離得到了7個單體化合物(30-36)；從韓國沿海真菌B382中分離得到6個單體化合物(37-42)：從韓國沿海真菌B523中分離得到了6個單體化合物(43-48)；從哈氏刻肋海

4、膽(Temnopleurus hardwickii)中分離得到了3個單體化合物(49-51)；從星座美洲海鞘(Amaroucium constellatum)中分離得到了9個單體化合物(52-60)，共計60個化合物。 繼而，利用理化性質和波譜學方法(IR，UV，MS，NMR，X-ray)結合化學反應的方法闡明了這60個化合物的化學結構(化合物結構參見Figure 1)，其中發(fā)現(xiàn)新化合物20個，包括8個聚gentisyl alc

5、ohol類化合物(1-8)(首次報道該類單體的三聚物)，3個gentisyl alcohol單體的衍生物(12，18，19)，5個SorbiciUin類衍生物(14-17，20)，1個玉米赤霉烯酮類化合物(37)，3個硫酸酯銨鹽類化合物(49-51)。此外還有1個化合物(13)為首次從天然來源中分離得到。另外發(fā)現(xiàn)的其他已知化合物的結構類型還涉及17個苯的衍生物(9-11，22-29，43，47-48，56-58)，1個Sorbicill

6、in類衍生物(21)，3個甾醇類化合物(33，34，53)，2個腦苷酯類化合物(31-32)，3個生物堿類化合物(30，35-36)，5個玉米赤霉烯酮類化合物(38-42)，3個蒽醌類衍生物(44-46)，4個核苷類衍生物(52、55、59-60)，1個甘油醚類化合物(54)。 利用流式細胞術結合形態(tài)學檢測、MTT和SRB法，對所分得的新化合物的體外抗腫瘤活性進行了初步評價。新化合物1-8對HL-60、MOLT-4、A-549和

7、BEL-7402四種細胞株都表現(xiàn)出不同程度的抑制活性，其中化合物6對四種癌細胞的活性都較強。在對6的進一步研究中發(fā)現(xiàn)，該化合物在10μM濃度下對酪氨酸激酶Src和KDR，抑制率分別為35.9％和31.8％。同時還發(fā)現(xiàn)新化合物14、15對HL-60有較弱的抑制活性(IC50分別為9.2和37.8μM)，14對A-549有較弱的抑制活性(IC50為39.μM)。此外，在以DPPH為模型的抗氧化試驗中，發(fā)現(xiàn)聚酚類化合物(1-8)和單體(12，

8、13)均顯示較強的活性(IC50分別為4.3，4.6，4.4，6.2，5.2，4.1，6.3，2.6,8.5和9.8μM)，明顯強于陽性對照物維生素C(IC50為17.4μM)。 綜上所述，本文對4株海洋真菌和2種海洋底棲動物的次級代謝產物進行了系統(tǒng)研究，共分離鑒定了60個化合物的結構，包括新化合物20個并推測了其中12個新化合物可能的生合成途徑；發(fā)現(xiàn)了一類結構新穎的具有抗腫瘤、抗氧化等多重活性gentisyl alcohol聚