中藥鵝不食草提取物對人鼻咽癌細胞CNE-1增殖抑制和凋亡誘導作用的研究.pdf

1、中藥鵝不食草系菊科(Asteraceae)石胡荽屬(Centipeda)植物鵝不食草(Centipedaminima(L.)A.Br.et Aschers.)的干燥全草，用于治療鼻炎。鼻咽癌多發(fā)于我國南方地區(qū)，尤其是廣東省，因其惡性程度較高，尚無對其有效的治療藥物和方法。文獻記載鵝不食草有抗鼻咽癌的功效，但目前的研究主要側重臨床實例報道，對其作用機制尚無系統(tǒng)研究，本論文對鵝不食草提取物體外和體內抗鼻咽癌活性進行了研究，并對其作用機制進行

2、初步探討:
　　 (1)通過MTT法對鵝不食草水提物和醇提物進行抗鼻咽癌活性篩選，研究發(fā)現(xiàn)乙醇提取物(CME)在16.4～50μg/mL濃度范圍內對人鼻咽癌CNE-1細胞表現(xiàn)出明顯的抑制作用，并呈明顯的時間-劑量依賴關系。進一步研究表明CME的石油醚和乙酸乙酯部分具有明顯的活性，為有效部位。
　　 (2)利用Hoechst33258熒光染色法和流式細胞術Annexin V FITC/PI染色法對CME抑制CNE-1細胞增

3、殖機制進行初步探討，研究表明，CME對CNE-1細胞具有明顯的凋亡誘導作用，并有明顯的時間依賴性。
　　 (3)流式細胞術PI染色法檢測CNE-1細胞周期變化，結果表明CNE-1細胞周期阻滯在G2/M期，并呈現(xiàn)明顯的時間劑量依賴性。
　　 (4)利用蛋白免疫印跡(Western blot)方法，對CME誘導CNE-1凋亡的作用機制進行了進一步探討，研究表明，CME作用于CNE-1細胞后:
　　 a.胞內DNA修復

4、酶PARP含量明顯減少，其水解產物之一Cleaved-PARP含量明顯增加。
　　 b.胞質中細胞色素c和主要的凋亡通路相關蛋白Caspase3、Caspase9、Caspase8顯著上調。
　　 c.Procaspase3、Procaspase9、Procaspase8含量均有所減少。
　　 d.Bcl-2蛋白家族中抗凋亡蛋白Bcl-2顯著下調，而促凋亡蛋白Bax明顯上調，Bax/Bcl-2比例明顯上調。