間隙連接蛋白Cx26和Cx43在移行細胞癌中的表達.pdf

1、細胞間隙連接(gapjunction，GJ)是位于相鄰細胞間的膜通道結構，由細胞膜上的連接子(connexon)相互銜接而成。連接子含有6個相同的啞鈴形蛋白亞單位，每個亞單位即細胞間隙連接蛋白(connexin，Cx)。相鄰細胞間通過間隙連接所介導的細胞間隙連接通訊(gapjunctionintercellularcommunication，GJIC)進行著信息和能量的交換，參與細胞間物質(zhì)交換的代謝偶聯(lián)和電信號傳導的電偶聯(lián)，對細胞的新陳

2、代謝、增殖、分化以及內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定等生理過程起著重要的調(diào)控作用。腫瘤是一種增殖失控和分化紊亂、嚴重威脅人類健康和生命的一類疾病，而起源于尿路上皮移行細胞的惡性腫瘤是泌尿外科最常見的腫瘤之一。間隙連接蛋白異常表達所導致的細胞間物質(zhì)和信息交流功能的缺陷與多種腫瘤的惡性增殖和轉化密切相關，而且與藥敏基因抗癌產(chǎn)生的旁觀者效應有關，GJIC與旁觀者效應的關系已得到充分證實，已成為當今腫瘤學研究的新熱點、新動向。作為GJIC基本結構單位的Cx是一個多

3、基因、發(fā)育上保守的大家族，在各種組織的表達既有一定的組織特異性，又呈交叉現(xiàn)象。Cx26、Cx43在正常乳腺、膀胱等組織中均具有表達，其異常表達可能與包括膀胱癌在內(nèi)的多種尿路上皮癌的發(fā)生有關。本實驗擬研究間隙連接蛋白Cx26和Cx43在正常尿路上皮中的表達及其與尿路上皮移行細胞癌生物學行為的關系，探討移行細胞癌的發(fā)生、發(fā)展機理；期望為移行細胞癌的早期診斷提供新的指標，為開辟其藥物治療新途徑提供實驗和理論依據(jù)。實驗方法和結果總結如下：

4、 1.HE染色篩選標本：(1)、確定正常組織標本無增生、化生、癌變等病理改變；(2)、結合臨床資料根據(jù)WHO及UICC標準對腫瘤組織分別進行分級和分期。 2.通過免疫組化SABC法分別觀察正常尿路上皮以及移行細胞癌中Cx26、Cx43的表達情況。每批染色均設立以PBS代替一抗、二抗的陰性對照，高表達Cx26的正常乳腺組織作陽性對照。發(fā)現(xiàn)Cx26高表達于所有正常尿路上皮(膀胱、輸尿管、腎盂)，主要定位于移行細胞膜上，分布較為均勻

5、，在移行細胞癌中表達明顯減低或無表達。Cx43在正常尿路上皮中表達多變，陽性強弱程度不一，主要分布于胞質(zhì)及胞膜上，有的固有層呈陽性，少數(shù)標本未見表達。移行細胞癌中Cx43陽性表達顯著降低。 3.運用LeicaQwin計算機病理圖像分析系統(tǒng)對Cx26、Cx43在正常尿路上皮及移行細胞癌中的表達進行定量檢測。圖像測量包括陽性顯色的相對面積(％)和顯色的強度(用灰度值表示)。發(fā)現(xiàn)Cx26在正常尿路上皮中平均陽性相對面積為45.83±2

6、.98，平均灰度值為111.78±4.16，在移行細胞癌中平均陽性相對面積降低為18.58±16.41，平均灰度值增加為148.32±22.92，并且隨著移行細胞癌惡性程度的增高，陽性面積逐漸下降、灰度值逐漸增大。Cx43在正常尿路上皮中平均陽性相對面積為31.02±11.89，平均灰度值為132.22±17.65，在移行細胞癌中平均陽性相對面積降低為9.59±8.58，平均灰度值增加為165.79±13.85。 4.統(tǒng)計學分析

7、：采用SPSS10.0軟件進行統(tǒng)計學分析。組間率的比較采用x2檢驗，病理圖像分析所得數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差(x±s)表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用最小顯著差異法(LSD)，相關性分析采用Spearman等級相關。以P＜0.05為顯著差異，P＜0.01為非常顯著差異，P＞0.05為相差不顯著。Cx26在移行細胞癌中的表達與正常尿路上皮相比，無論是定性還是定量都有顯著性差異(P＜0.05)，隨著移行細胞癌(TCC)惡性程度的增

8、加表達逐漸減弱(P＜0.05)，在膀胱癌、輸尿管癌、腎盂癌之間表達沒有顯著差異(P＞0.05)，即與腫瘤發(fā)生部位無關，Cx26表達與腫瘤分期也無明顯相關性(P＞0.05)。Cx43在正常尿路上皮中雖也有表達，但表達強弱不等、缺乏特異性，在TCCⅠ、Ⅱ、Ⅲ級之間Cx43的表達沒有顯著差異(P＞0.05)。結論：間隙連接家族成員中，Cx26而并非Cx43是尿路移行上皮中具有相對組織特異性表達的基因，對維持正常尿路上皮細胞物質(zhì)和信息的傳遞等起