LOX-1-PPARγ在ox-LDL誘導血管內皮細胞炎性分子表達中的作用.pdf

1、本研究的目的在于探討LOX-1是否介導ox-LDL上調血管內皮細胞分泌粘附分子和趨化因子;再此基礎上進一步探討LOX-1/PPARγ信號途徑在ox-LDL誘導血管內皮細胞粘附分子表達中的作用.研究方法:1、LOX-1與ox-LDL結合并介導對血管內皮細胞的損傷用胰酶灌注消化法分離并原代培養(yǎng)HUVECs,并從細胞的形態(tài)學、人第Ⅷ因子相關抗原以及透射電鏡觀察超微結構等方面對培養(yǎng)的細胞進行鑒定.2、Ox-LDL誘導血管內皮細胞表達LOX-1用

2、n-LDL、polyinosonic acid、carrangeenan以及不同濃度的ox-LDL處理培養(yǎng)的HUVECs,用Realtime RT-PCR測定LOX-1 mRNA的表達水平,用Western blot測定LOX-1蛋白表達水平,觀察ox-LDL對HUVECs表達LOX-1的影響以及LOX-1在ox-LDL誘導其自身表達中所起的作用.3、Ox-LDL通過LOX-1誘導血管內皮細胞趨化因子和粘附分子的表達用不同濃度ox-LD

3、L培養(yǎng)HUVECs,用RT-PCR測定MCP-1、ICAM-1、VCAM-1以及E-selectin的mRNA表達;用Western blot測定MCP-1、ICAM-1、VCAM-1以及E-selectin蛋白的表達,觀察ox-LDL對血管內皮細胞粘附分子和趨化因子表達的影響.4、PPARγ在ox-LDL通過LOX-1上調粘附分子表達中的作用用不同濃度ox-LDL處理培養(yǎng)的HUVECs;或HUVECs預先用polyinosonic a

4、cid和carrangeenan處理,再用ox-LDL培養(yǎng),分別用Realtime RT-PCR和Western blot測定PPARγ的表達,觀察ox-LDL對HUVECs PPARγ表達的影響.分別單獨使用polyinosonic acid和1 5d-PGJ2、或聯(lián)合使用polyinosonic acid和15d-PGJ2預先培養(yǎng)HUVECs,再用ox-LDL培養(yǎng),分別用RT-PCR和Western blot測定ICAM-1、E-s