化合物RY10-4部分作用機制及抗腫瘤活性的研究.pdf

1、本論文主要對新型特異性抗腫瘤化合物RY10-4的部分作用機制及其抗腫瘤活性進行了研究,主要內容分為兩部分:第一部分研究了RY10-4誘導人乳腺癌MCF-7細胞自噬性死亡的作用及其影響的相關信號傳導通路,同時將RY10-4與原芹菜素在自噬缺陷的乳腺癌MCF-7細胞系中誘導細胞自噬活性的差異進行了對比,探討RY10-4抗乳腺癌作用的潛在機制及其抗乳腺癌作用優(yōu)于原芹菜素的可能原因;第二部分主要研究了RY10-4體外和體內抑制人肝癌HepG2細

2、胞增殖的作用,探討其體內外抗肝癌的活性,并對其抗肝癌活性相關的作用機制進行了初步研究。
　　第一部分:RY10-4誘導乳腺癌細胞系MCF-7自噬性細胞死亡作用的研究
　　目的:鑒于原芹菜素類似物RY10-4表現(xiàn)出更好的體外抗腫瘤作用及較低的體內不良反應,本部分探討其可能的作用機制。研究RY10-4誘導人乳腺癌MCF-7細胞自噬的活性,并與原芹菜素的作用進行比較;另外,進一步研究RY10-4誘導的自噬活性在抑制腫瘤細胞增殖中的

3、作用以及相關的信號傳導通路。
　　方法:通過免疫熒光法檢測細胞內LC3B蛋白的表達和分布、MDC染色法、WesternBlot法檢測LC3B和p62蛋白的表達以及電子顯微鏡對細胞超微結構的分析,綜合判斷RY10-4與原芹菜素是否誘導MCF-7細胞自噬的發(fā)生;通過應用自噬抑制劑和干擾自噬相關基因的表達對RY10-4誘導的自噬活性在細胞死亡中的作用進行研究;通過WesternBlot檢測相關通路蛋白的表達水平研究RY10-4誘導自噬所

4、涉及的信號通路。
　　結果:RY10-4可誘導MCF-7細胞自噬的發(fā)生,而原芹菜素沒有這方面的作用;自噬抑制劑3-MA或干擾自噬相關基因ATG7的表達抑制細胞自噬活性后,RY10-4處理后細胞的存活率顯著提高;另外,RY10-4處理后細胞磷酸化mTOR和p70S6K的表達呈濃度依賴性的降低,磷酸化Akt的表達呈濃度和時間依賴的降低,而AMPK的活性基本無變化。
　　結論:RY10-4通過Akt/mTOR通路抑制mTOR信號而

5、誘導MCF-7細胞的自噬,并作為一種抑制腫瘤細胞增殖作用的機制,促進了腫瘤細胞的死亡。
　　第二部分:RY10-4體外和體內抗肝癌作用的研究
　　目的:研究RY10-4體外和體內抑制人肝癌HepG2細胞增殖的作用,探討RY10-4體內外抗肝癌的活性,并對其抗肝癌活性的相關作用機制進行研究。
　　方法:通過SRB染色法、貼壁集落形成試驗研究RY10-4抑制HepG2細胞體外增殖的作用;通過PI染色法流式細胞儀分析RY10

6、-4細胞周期阻滯作用;Hoechst33342熒光染色法、AnnexinV/PI雙染法流式細胞儀檢測對RY10-4誘導細胞凋亡的作用進行研究;應用活性氧檢測試劑盒及線粒體膜電位檢測試劑盒研究RY10-4誘導活性氧生成和線粒體膜電位的變化,并使用抗氧化劑NAC進行驗證;以人肝癌HepG2細胞裸小鼠異種移植瘤模型評價RY10-4的體內抗肝癌活性。結果:RY10-4顯著抑制HepG2細胞體外的增殖活性,減少其體外的克隆形成率;RY10-4處理

7、后細胞的S期和G2/M期細胞比率明顯增加,出現(xiàn)明顯的凋亡細胞的形態(tài)特征,凋亡細胞比率顯著增高;RY10-4可誘導細胞活性氧的生成,降低線粒體膜電位,NAC能抑制RY10-4的上述作用;RY10-4顯著抑制荷瘤裸鼠HepG2移植瘤的生長,且對動物的血液和肝腎功能無明顯影響。
　　結論:RY10-4具有良好的體外和體內的抗肝癌活性,其可能的作用機制包括:RY10-4可以阻滯細胞周期的進程;RY10-4通過增加細胞內ROS的生成,引起細