高效液相色譜熒光法同時測定血清色氨酸、犬尿氨酸和犬尿喹啉酸及其在SLE中的應(yīng)用.pdf

1、目的：⑴建立一種簡單、快速的高效液相色譜熒光法(HPLC-FLD)測定血清中的色氨酸(TRP)、犬尿氨酸(KYN)和犬尿喹啉酸(KYNA)。⑵探討系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者血清TRP、KYN和KYNA含量變化及其臨床意義。
　　 方法：①血清標本經(jīng)0.624mol/L高氯酸溶液去除蛋白質(zhì)后取上清液20μL直接進樣分析測定；色譜柱為Hypersil C18柱(250mm×4.6mmi.d,7μm)，流動相為0.20mol/L醋酸

2、鋅、8.3mmol/L醋酸和2.5％的乙腈，流速為1.5ml/min；熒光檢測激發(fā)波長和發(fā)射波長在0～11min為365nm和480nm,11～15.5min變換為344nm和404nm,15.5～21min為254nm和404nm；室溫下測定；20分鐘內(nèi)完成測定；TRP、KYN和KYNA峰均采用峰保留值比較法和疊加法定性分析，用外標法測峰面積進行定量分析；同時探討了檢測波長、流動相種類、流動相中有機相的比例等因素對分離度和靈敏度的影響

3、，考察了其它5種血清內(nèi)源性物質(zhì)對待測組分的可能干擾。②測定系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者（n＝50例）血清TRP、KYN和KYNA，初步探討其含量變化在鑒別診斷、治療監(jiān)測、機制研究等方面的臨床意義。分析血清TRP、KYN和KYNA以及KYN/TRP、KYNA/KYN比值與疾病發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)性。
　　 結(jié)果：⑴KYN保留時間約為8.5min，線性范圍為0.049～98μmol/L，最低檢出濃度為0.0245μmol/L，平均回收率

4、為97.45％；KYNA保留時間約為13.7min，線性范圍為1.05～1047μmol/L，最低檢出濃度為0.05nmol/L，平均回收率為100.60％；TRP保留時間約為17.6min，線性范圍為0.61～196μmol/L，最低檢出濃度為0.005μmol/L，平均回收率為103.71％；日內(nèi)和日間測定值的相對標準偏差均小于5％；苯丙氨酸(Phe)、酪氨酸(Tyr)、5-羥色胺(5-HT)和肌酐(Cr)在本文的色譜條件下對測定均

5、無干擾。⑵與正常對照組比較，SLE患者TRP含量顯著減少，KYN和KYNA的含量及KYN/TRP的比值都顯著增高.而KYNA/KYN比值變化不大。
　　 結(jié)論：①建立了HPLC-FLD法同時測定血清TRP、KYN和KYNA，該方法的精密度，準確性，回收率，抗干擾能力，線性范圍等指標均符合診斷實驗的要求，具有進樣量少、簡單、快速、靈敏、特異的特點，適宜于臨床與科研工作。②SLE患者體內(nèi)存在嚴重的色氨酸代謝紊亂，同時測定TRP、KY