生長因子聯(lián)合誘導大鼠骨髓間充質干細胞向軟骨分化的實驗研究.pdf

1、目的本實驗旨在建立體外分離、擴增培養(yǎng)大鼠骨髓間充質干細胞(MSCs)的方法，描述其生物學特征。探索在體外單層培養(yǎng)條件下，生長因子轉化生長因子(TGF—β1)、胰島素樣因子(IGF—I)和骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP一2)誘導MSCs向軟骨細胞分化的最佳組合。 方法用密度梯度離心法結合貼壁培養(yǎng)法，分離純化大鼠MSCs。取第4代MSCs進行成骨、成脂肪誘導分化，觀察細胞的形態(tài)變化情況，成骨誘導組在誘導第14d進行茜素紅染色：成脂肪誘導組在

2、誘導第14d進行油紅染色：取第4～6代細胞，在體外單層培養(yǎng)條件下，應用TGF-βl、IGF-I、BMP-2的組合，作為誘導分化因子進行培養(yǎng)，觀察細胞的生長情況，在誘導第21d用RT-PCR法檢測細胞表達II型前膠原mRNA水平，阿新藍染色檢測蛋白聚糖合成情況。 結果從骨髓分離獲得的MSCs為體積小、核漿比大、梭形細胞，呈旋渦狀生長。MSCs在相應的誘導條件下，分化成骨、脂肪、軟骨細胞。半定量RT-PCR檢測轉化細胞II型前膠原m

3、RNA水平顯示：TGF-β1組II型前膠原mRNA表達水平明顯高于IGF-I+BMP-2組(O．48vsO．15，P

4、 結論密度梯度離心結合貼壁培養(yǎng)法可分離出較純的MSCs，經(jīng)擴增培養(yǎng)后獲取足夠數(shù)量的MSCs，能滿足組織工程的需要。MSCs具有多向分化的潛能，可在體外誘導分化成骨細胞、脂肪細胞和軟骨細胞，具有廣闊的應用前景TGF-pl具有單獨誘導MSCs向軟骨分化的能力；IGF-I與BMP-2合用時有較弱的誘導MSCs分化成軟骨能力；IGF-I或BMP-2與TGF-p1合用，在誘導MSCs向軟骨分化時有協(xié)同作用；而當TGF-β1、IGF-I、BMP-