轉mAM79基因玉米的獲得及草甘膦抗性分析.pdf

1、來源于細菌的EPSPS編碼基因AM79 aroA可用于培育抗草甘膦轉基因作物。實驗室前期工作對AM79 aroA基因進行了人工改造合成，合成的基因命名為mAM79。本研究對實驗室前期獲得的轉mAM79基因玉米材料進行了分子鑒定及草甘膦抗性分析。同時為了獲得更多的具有不同插入位點的轉基因事件，本研究將mAM79基因表達框插入到玉米Ds轉座子元件中，構建了植物表達載體p3301-ZmDs-UbiSpAM79，將此載體轉化玉米，獲得了轉基因玉

2、米植株，并對轉基因植株的草甘膦抗性進行了初步分析。主要研究結果包括:
　　1、對實驗室前期獲得的轉基因玉米株系進行PCR分析，結果表明mAM79基因已經(jīng)整合到了這些轉基因玉米株系的基因組中。RT-PCR分析結果表明，mAM79基因在7個獨立的轉基因玉米株系中都有較高的轉錄水平。但是，Western blot分析結果表明，7個獨立的轉基因玉米株系中AM79 EPSPS蛋白水平有很大的差異，其中AM85和AM72這兩個株系的AM79

3、EPSPS蛋白表達量顯著高于其它株系。田間噴施4倍濃度的草甘膦時，這兩個轉基因株系能夠正常生長，其它轉基因玉米植株的生長均受到影響，而非轉基因玉米均死亡。研究結果表明mAM79基因可以用于培育抗草甘膦轉基因玉米，并且獲得的轉基因玉米株系可以作為培育抗草甘膦轉基因玉米的重要材料。
　　2、將mAM79基因表達框插入到玉米Ds轉座子元件中，構建了植物表達載體p3301-ZmDs-UbiSpAM79，并將此植物表達載體通過農(nóng)桿菌轉化法轉

4、化玉米，獲得5個轉基因玉米株系。對T1代轉基因植株的PCR分析結果表明，mAM79基因已經(jīng)整合到了這些轉基因玉米株系的基因組中。RT-PCR的分析結果表明，5個獨立的轉基因玉米株系中mAM79基因都有較高的轉錄水平。草甘膦噴施實驗結果表明，所獲得的轉基因玉米株系具有很好的草甘膦抗性。本研究獲得了具有較高草甘膦抗性的基于Ds的轉mAM79基因玉米，下一步是通過與含有Ac轉座酶的玉米活性系雜交，使mAM79基因表達框跳躍，以獲得更多的具有不