體外轉染二甲基精氨酸二甲胺水解酶改善高膽固醇血癥兔胸主動脈內皮功能不全.pdf

1、研究背景和目的動脈粥樣硬化是嚴重危害人類健康的一種慢性血管病變。一氧化氮介導的內皮依賴性血管舒張反應降低是動脈粥樣硬化的一個早期標志。大量研究表明，內源性一氧化氮合酶(NOS)抑制物—非對稱性二甲基精氨酸(ADMA)可能是導致血管內皮功能不全的重要物質。而內皮細胞中ADMA的主要代謝酶2型二甲基精氨酸二甲胺水解酶(DDAH2)表達和活性的降低與內源性ADMA升高密切相關。但目前尚無直接增加DDAH2表達和活性的藥物。隨著分子生物學及基因

2、工程技術的飛速發(fā)展，基因治療成為防治動脈粥樣硬化的一條頗有希望的新途徑。已有學者成功地將重組含內皮型一氧化氮合酶(eNOS)、超氧化物歧化酶(SOD)基因腺病毒轉染到動脈粥樣硬化的動物血管，但并不能完全改善內皮依賴性血管舒張功能。因此本課題擬構建重組DDAH2腺病毒載體，將其導入高脂飼養(yǎng)致動脈粥樣硬化兔的離體胸主動脈，探討DDAH2過表達對動脈粥樣硬化內皮功能不全的保護作用，為DDAH2基因治療動脈粥樣硬化性心血管疾病在臨床上的推廣應用

3、提供可靠的實驗依據(jù)。 方法①采用分子克隆技術構建hDDAH2重組穿梭載體和hDDAH2重組腺病毒載體，并在293細胞內包裝、鑒定、擴增，純化后獲得高滴度的病毒懸液；②用高脂、高膽固醇飼養(yǎng)家兔12w，制備動脈粥樣硬化動物模型，并經血脂測定、離體胸主動脈環(huán)內皮依賴性血管舒張功能檢測和病理切片鑒定模型制備成功；③用重組hDDAH2腺病毒(1.5×1010virus/ml)體外轉染高脂血癥動物的胸主動脈環(huán)和正常動物的胸主動脈環(huán)，并經RT

4、-PCR證明轉染血管DDAH2表達增高，然后用離體血管環(huán)法檢測DDAH2過表達對動脈粥樣硬化血管內皮依賴性舒張功能損害的影響。 結論①本研究在國內外首次成功構建hDDAH2重組腺病毒載體，并證明腺病毒介導的hDDAH2基因能在血管壁中有效表達并具有生物學活性；②首次將hDDAH2重組腺病毒導入動脈粥樣硬化家兔的離體血管，并能上調血管組織中DDAH2的表達和活性，逆轉血管的內皮依賴性舒張功能不全；③本研究進一步證實了DDAH2表達