抗體芯片技術(shù)在慢性腎臟病患者尿液細(xì)胞因子檢測(cè)中的應(yīng)用及意義探討.pdf

1、目的：各種慢性腎臟病進(jìn)行性發(fā)展的共同結(jié)局是終末期腎病(end stage renal disense，ESRD)，ESRD已成為嚴(yán)重威脅人類健康的常見病，目前的腎臟替代治療雖然獲得了長(zhǎng)足的進(jìn)步，但是ESRD仍有較高的死亡率，其治療費(fèi)用已成為嚴(yán)重的社會(huì)負(fù)擔(dān)。如何早期發(fā)現(xiàn)慢性腎臟病(Chronic kidneydisenses CKD)并采取有效措施延緩其進(jìn)展至ESRD，已成為人類面臨的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。CKD慢性進(jìn)展的實(shí)質(zhì)是腎臟纖維化，研究已經(jīng)證

2、實(shí)它與腎臟產(chǎn)生的多種細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子的作用有關(guān)，然而臨床上尚缺乏早期、動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)腎臟纖維化進(jìn)程的有效方法。既往研究表明尿液中細(xì)胞因子的水平與CKD的發(fā)生、發(fā)展有著十分密切的聯(lián)系，但能否應(yīng)用尿液中的細(xì)胞因子變化譜來動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)CKD進(jìn)程仍然是腎病工作者亟需探討的問題。蛋白組學(xué)時(shí)代的到來以及相關(guān)技術(shù)的出現(xiàn)，為我們探討此問題提供了嶄新的技術(shù)平臺(tái)。本研究應(yīng)用一種全新的蛋白組學(xué)技術(shù)-抗體芯片(antibody array)技術(shù)檢測(cè)CKD患者尿液中細(xì)胞

3、因子的變化并探討其臨床意義。 材料與方法：選擇7例CKD患者，全部符合美國(guó)腎臟病基金會(huì)K/DOQI指南中慢性腎臟病的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并且有明確的腎臟病理診斷。應(yīng)用MDRD公式計(jì)算GFR水平，并依據(jù)GFR水平，將7例患者分為兩組：I組：GFR≥80ml/min/1.73m<'2>共4例；Ⅱ組：GFR≤40 ml/min/1.73m<'2>共3例。另外，選取3名性別、年齡相匹配的健康志愿者作為正常對(duì)照。應(yīng)用Raybiotech人類細(xì)胞因子

4、抗體芯片，依據(jù)試劑盒中操作手冊(cè)進(jìn)行操作，同時(shí)檢測(cè)各組尿液中細(xì)胞因子水平。在此基礎(chǔ)之上，選取2種有表達(dá)差異的細(xì)胞因子，應(yīng)用經(jīng)典的ELISA方法進(jìn)行定量分析，以驗(yàn)證細(xì)胞因子抗體芯片技術(shù)的可靠性。 結(jié)果：與正常對(duì)照組相比，共有15種因子的水平發(fā)生了顯著變化。MCP-1、RANTES、TIMP-1、TNF-α、VEGF、E．selectin、Fas、ICAM-1、IL-2、MMP-2、TGF-β、E-cadhenrin水平同正常對(duì)照組相

5、比升高了2-5倍。其中MCP-1、RANTES、TIMP-1、TNF-α和VEGF的水平隨著受損程度加重而進(jìn)一步升高。而VCAM-1和PDGF-BB的水平同正常對(duì)照組相比有下降趨勢(shì)。在芯片所包含的2C種細(xì)胞因子中MMP-9的水平變化尤其顯著，同正常對(duì)照組相比，CKDI組表達(dá)水平是正常對(duì)照組的492.8倍，CKDII組表達(dá)水平是正常對(duì)照組的198.7倍。為了驗(yàn)證檢測(cè)結(jié)果的可靠性，我們選擇了2種在抗體芯片檢測(cè)過程中有明顯差異的細(xì)胞因子-MC

6、P-1和TNF-α，然后應(yīng)用經(jīng)典的ELISA方法進(jìn)行檢測(cè)，并同抗體芯片技術(shù)所得結(jié)果進(jìn)行了比較，我們發(fā)現(xiàn)兩種方法檢測(cè)結(jié)果具有良好的相關(guān)性。在檢測(cè)MCP-1水平時(shí)兩者的相關(guān)系數(shù)，值為0.976(p<0.001)，在檢測(cè)TNF-α水平時(shí)兩者的相關(guān)系數(shù)r值為0.939(p<0.001)。 結(jié)論：抗體芯片技術(shù)能夠高通量、平行性檢測(cè)尿液中多種細(xì)胞因子的表達(dá)水平?？贵w芯片所得到的半定量數(shù)據(jù)能夠真實(shí)反應(yīng)尿液細(xì)胞因子的水平?？贵w芯片檢測(cè)結(jié)果提示C