Survivin在喉癌組織中的表達(dá)及其與P53基因表達(dá)和HPV16-18感染的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：研究凋亡抑制基因survivin在喉部鱗狀細(xì)胞癌（laryngeal squamous cell carcinoma LSCC）組織中的表達(dá)及其與P53基因表達(dá)和HPV16/18感染的相關(guān)性，探討survivin基因在LSCC發(fā)生發(fā)展中的意義以及survivin基因，P53基因和HPV16/18-E6之間可能存在的關(guān)聯(lián)及相互作用的機(jī)制。 方法：選擇喉鱗癌組織標(biāo)本46例，患者術(shù)前均未做過放射治療和化學(xué)治療，均無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，分別

2、記錄喉癌患者的年齡、性別、臨床分型、組織分化程度、臨床分期及頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況。所有喉鱗癌患者均經(jīng)手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)，且不合并其他部位腫瘤。其中男性44例，女性2例；年齡37～78歲，平均57.0±10.86歲。按照2002年UICC頭頸部惡性腫瘤分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床分期，臨床Ⅰ期6例（TIN0M06例）；臨床Ⅱ期10例（T2N0M010例）；臨床Ⅲ期18例（T3N0M09例，TIN1M01例，T2N1M03例，T3N1M05例）；臨床Ⅳ

3、期12例（T4N1M02例，T2N2M04例，T3N2M04例，T4N2M02例）。聲門型27例，聲門上型17例，聲門下型2例。按病理分級(jí)，G1（高分化癌）28例，G2（中分化癌）13例，G3（低分化癌）5例。另外，分別選喉部癌前病變中重度不典型增生（laryngeal precancerous lesion，LPL）組織標(biāo)本20例，聲帶息肉（vocal card polyp，VCP）20例。全部標(biāo)本均經(jīng)重新切片HE染色確診。用免疫組織

4、化學(xué)即鏈霉菌抗生物素蛋白.過氧化物酶連結(jié)法（S-P法）檢測survivin及HPV16/18-E6、P53在上述三種喉部組織中的表達(dá)。所有染色標(biāo)本均進(jìn)行數(shù)值測量及染色強(qiáng)度判斷，survivin與HPV16/18——E6、P53蛋白陽性判斷采用Sinicrope改良法。每張切片在高倍鏡下（400倍）選取5個(gè)視野，利用Image-Pro Plus6.0圖像分析系統(tǒng)計(jì)數(shù)。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS11.5軟件包，分別進(jìn)行方差分析、t檢驗(yàn)、x2檢驗(yàn)

5、及精確檢驗(yàn)。并對(duì)檢測結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析。 結(jié)果：1、Survivin的表達(dá)：Survivin蛋白表達(dá)主要見于細(xì)胞漿，棕黃色顆粒彌漫分布于整個(gè)包漿，少部分伴有細(xì)胞核陽性染色。20例聲帶息肉組織中survivin蛋白表達(dá)均為陰性，20例LPL中9例survivin蛋白表達(dá)陽性，陽性率45%，而46例LSCC組織中33例survivin蛋白表達(dá)陽性，陽性率為71.74%，三組比較差異有極顯著性意義（x2=28.86，P<0.01），組

6、間兩兩比較，VCP與LPL間的差異有顯著性意義（x2=9.176，P<0.01），LPL與LSCC間的差異有顯著性意義（x2=4.307，P<0.05），VCP與LSCC間的差異有顯著性意義（x2=28.696，p<0.01）；對(duì)三種喉部組織中survivin蛋白染色強(qiáng)度計(jì)分，46例LSCC中，Survivin表達(dá)強(qiáng)度評(píng)分在0-12之間，平均為6.67±2.3。20例LPL組織中，survivin表達(dá)強(qiáng)度評(píng)分在0-9分之間，其平均為3.

7、67±1.4。20例VCP組織中survivin表達(dá)強(qiáng)度評(píng)分為0分。方差分析及兩兩比較差異有顯著意義（p<0.05）； LSCC組織中survivin表達(dá)與TNM分期有關(guān)，組間兩兩比較，組間兩兩比較，Ⅰ+Ⅱ期與Ⅲ+Ⅳ間差異有顯著性，（x2=4.193，p<0.05）；與病理分級(jí)有關(guān)，高分化與中低分化間差異具有顯著性（x2=4.290，p<0.05）；survivin的表達(dá)還與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（x2=6.691，p<0.05），淋巴結(jié)轉(zhuǎn)

8、移組的survivin陽性率明顯增高，與患者的年齡（x2=0.053，p>0.05）及病變的部位（x2=0，043，p>0.05）無關(guān)； 2、P53的表達(dá)：LSCC、LPL和VCP組織中P53蛋白陽性信號(hào)積聚在腫瘤細(xì)胞核中，為深淺不一的棕黃色顆粒，表達(dá)率分別為LSCC組65.2%（30/46），LPL組35%（7/20）和VCP組0%（0/20），差異有顯著性意義（x2=24.873，P<0.01），其中VCP組與LPL組、LS

9、CC組之間差異有顯著性意義（x2=6.234，p<0.05；x2=23.913，p<0.01）。LPL組與LSCC組差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=5.167，P<0.05）； 3、HPV16/18-E6的表達(dá)：VCP、LPL及LSCC組織中HPV16/18-E6蛋白陽性產(chǎn)物主要定位于細(xì)胞核中，為深淺不一的棕黃色顆粒，表達(dá)率分別為5%（1/20），35%（7/20）和43.5%（20/46），三者比較差異有顯著性意義（x2=9.47

10、0，P<0.01），其中VCP組與LPL組及LSCC組之間差異有顯著性意義（x2=4.464，P<0.05；x2=9.513，P<0.01）。LPL組與LSCC組差異無顯著意義（x2=0.415，P>0.05）； 4、LSCC組織中survivin蛋白表達(dá)與P53蛋白表達(dá)的相關(guān)性：LSCC組織中Survivin表達(dá)與P53表達(dá)密切相關(guān)，P53蛋白表達(dá)陽性、陰性的組織中，Survivin基因表達(dá)陽性率分別為90%（27/30）、3

11、7.5%（6/16），差異具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=11.715，P<0.01），兩者之間經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)分析，結(jié)果顯示，兩者呈正相關(guān)關(guān)系（r=0.801，p<0.01）； 5、LSCC組織中survivin蛋白表達(dá)與HPV16/18-E6蛋白表達(dá)的相關(guān)性：喉鱗癌組織HPV16/18-E6表達(dá)陽性、陰性者中survivin基因表達(dá)率分別為90%（18/20），57.69%（15/26），差異有顯著性意義（x2=5.8

12、20，p<0.05）。兩者之間經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)分析，結(jié)果顯示，兩者呈顯著正相關(guān)關(guān)系（r=0.735，p<0.05）； 結(jié)論：1.Survivin與喉鱗癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。survivin在喉部癌前病變非典型增生組織及鱗癌組織具有特異性表達(dá)，提示Survivin是喉部癌前病變及喉癌的較早期分子事件，是喉部鱗癌的早期預(yù)測指標(biāo)之一。 2.survivin與喉癌的病情進(jìn)展有關(guān)。其表達(dá)情況與癌細(xì)胞的組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

13、及臨床分期有顯著相關(guān)性，因此，survivin可作為喉癌的預(yù)后指標(biāo)。 3.survivin在喉癌中的表達(dá)與HPV16/18-E6感染呈正相關(guān)，這意味著survivin與HPV16/18-E6介導(dǎo)的細(xì)胞的破壞有聯(lián)系，其相互作用，抑制細(xì)胞凋亡，并使細(xì)胞向惡性轉(zhuǎn)化。 4.喉癌中Survivin蛋白的表達(dá)與P53表達(dá)呈正相關(guān)，提示由于P53失活而喪失了對(duì)survivin基因表達(dá)的下調(diào)作用而導(dǎo)致抗凋亡。 5.Survivi