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文檔簡介
1、目的:研究凋亡抑制基因survivin在喉部鱗狀細(xì)胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma LSCC)組織中的表達(dá)及其與P53基因表達(dá)和HPV16/18感染的相關(guān)性,探討survivin基因在LSCC發(fā)生發(fā)展中的意義以及survivin基因,P53基因和HPV16/18-E6之間可能存在的關(guān)聯(lián)及相互作用的機(jī)制。 方法:選擇喉鱗癌組織標(biāo)本46例,患者術(shù)前均未做過放射治療和化學(xué)治療,均無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,分別
2、記錄喉癌患者的年齡、性別、臨床分型、組織分化程度、臨床分期及頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況。所有喉鱗癌患者均經(jīng)手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí),且不合并其他部位腫瘤。其中男性44例,女性2例;年齡37~78歲,平均57.0±10.86歲。按照2002年UICC頭頸部惡性腫瘤分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床分期,臨床Ⅰ期6例(TIN0M06例);臨床Ⅱ期10例(T2N0M010例);臨床Ⅲ期18例(T3N0M09例,TIN1M01例,T2N1M03例,T3N1M05例);臨床Ⅳ
3、期12例(T4N1M02例,T2N2M04例,T3N2M04例,T4N2M02例)。聲門型27例,聲門上型17例,聲門下型2例。按病理分級(jí),G1(高分化癌)28例,G2(中分化癌)13例,G3(低分化癌)5例。另外,分別選喉部癌前病變中重度不典型增生(laryngeal precancerous lesion,LPL)組織標(biāo)本20例,聲帶息肉(vocal card polyp,VCP)20例。全部標(biāo)本均經(jīng)重新切片HE染色確診。用免疫組織
4、化學(xué)即鏈霉菌抗生物素蛋白.過氧化物酶連結(jié)法(S-P法)檢測survivin及HPV16/18-E6、P53在上述三種喉部組織中的表達(dá)。所有染色標(biāo)本均進(jìn)行數(shù)值測量及染色強(qiáng)度判斷,survivin與HPV16/18——E6、P53蛋白陽性判斷采用Sinicrope改良法。每張切片在高倍鏡下(400倍)選取5個(gè)視野,利用Image-Pro Plus6.0圖像分析系統(tǒng)計(jì)數(shù)。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS11.5軟件包,分別進(jìn)行方差分析、t檢驗(yàn)、x2檢驗(yàn)
5、及精確檢驗(yàn)。并對(duì)檢測結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析。 結(jié)果:1、Survivin的表達(dá):Survivin蛋白表達(dá)主要見于細(xì)胞漿,棕黃色顆粒彌漫分布于整個(gè)包漿,少部分伴有細(xì)胞核陽性染色。20例聲帶息肉組織中survivin蛋白表達(dá)均為陰性,20例LPL中9例survivin蛋白表達(dá)陽性,陽性率45%,而46例LSCC組織中33例survivin蛋白表達(dá)陽性,陽性率為71.74%,三組比較差異有極顯著性意義(x2=28.86,P<0.01),組
6、間兩兩比較,VCP與LPL間的差異有顯著性意義(x2=9.176,P<0.01),LPL與LSCC間的差異有顯著性意義(x2=4.307,P<0.05),VCP與LSCC間的差異有顯著性意義(x2=28.696,p<0.01);對(duì)三種喉部組織中survivin蛋白染色強(qiáng)度計(jì)分,46例LSCC中,Survivin表達(dá)強(qiáng)度評(píng)分在0-12之間,平均為6.67±2.3。20例LPL組織中,survivin表達(dá)強(qiáng)度評(píng)分在0-9分之間,其平均為3.
7、67±1.4。20例VCP組織中survivin表達(dá)強(qiáng)度評(píng)分為0分。方差分析及兩兩比較差異有顯著意義(p<0.05); LSCC組織中survivin表達(dá)與TNM分期有關(guān),組間兩兩比較,組間兩兩比較,Ⅰ+Ⅱ期與Ⅲ+Ⅳ間差異有顯著性,(x2=4.193,p<0.05);與病理分級(jí)有關(guān),高分化與中低分化間差異具有顯著性(x2=4.290,p<0.05);survivin的表達(dá)還與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(x2=6.691,p<0.05),淋巴結(jié)轉(zhuǎn)
8、移組的survivin陽性率明顯增高,與患者的年齡(x2=0.053,p>0.05)及病變的部位(x2=0,043,p>0.05)無關(guān); 2、P53的表達(dá):LSCC、LPL和VCP組織中P53蛋白陽性信號(hào)積聚在腫瘤細(xì)胞核中,為深淺不一的棕黃色顆粒,表達(dá)率分別為LSCC組65.2%(30/46),LPL組35%(7/20)和VCP組0%(0/20),差異有顯著性意義(x2=24.873,P<0.01),其中VCP組與LPL組、LS
9、CC組之間差異有顯著性意義(x2=6.234,p<0.05;x2=23.913,p<0.01)。LPL組與LSCC組差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=5.167,P<0.05); 3、HPV16/18-E6的表達(dá):VCP、LPL及LSCC組織中HPV16/18-E6蛋白陽性產(chǎn)物主要定位于細(xì)胞核中,為深淺不一的棕黃色顆粒,表達(dá)率分別為5%(1/20),35%(7/20)和43.5%(20/46),三者比較差異有顯著性意義(x2=9.47
10、0,P<0.01),其中VCP組與LPL組及LSCC組之間差異有顯著性意義(x2=4.464,P<0.05;x2=9.513,P<0.01)。LPL組與LSCC組差異無顯著意義(x2=0.415,P>0.05); 4、LSCC組織中survivin蛋白表達(dá)與P53蛋白表達(dá)的相關(guān)性:LSCC組織中Survivin表達(dá)與P53表達(dá)密切相關(guān),P53蛋白表達(dá)陽性、陰性的組織中,Survivin基因表達(dá)陽性率分別為90%(27/30)、3
11、7.5%(6/16),差異具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=11.715,P<0.01),兩者之間經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)分析,結(jié)果顯示,兩者呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.801,p<0.01); 5、LSCC組織中survivin蛋白表達(dá)與HPV16/18-E6蛋白表達(dá)的相關(guān)性:喉鱗癌組織HPV16/18-E6表達(dá)陽性、陰性者中survivin基因表達(dá)率分別為90%(18/20),57.69%(15/26),差異有顯著性意義(x2=5.8
12、20,p<0.05)。兩者之間經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)分析,結(jié)果顯示,兩者呈顯著正相關(guān)關(guān)系(r=0.735,p<0.05); 結(jié)論:1.Survivin與喉鱗癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。survivin在喉部癌前病變非典型增生組織及鱗癌組織具有特異性表達(dá),提示Survivin是喉部癌前病變及喉癌的較早期分子事件,是喉部鱗癌的早期預(yù)測指標(biāo)之一。 2.survivin與喉癌的病情進(jìn)展有關(guān)。其表達(dá)情況與癌細(xì)胞的組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移
13、及臨床分期有顯著相關(guān)性,因此,survivin可作為喉癌的預(yù)后指標(biāo)。 3.survivin在喉癌中的表達(dá)與HPV16/18-E6感染呈正相關(guān),這意味著survivin與HPV16/18-E6介導(dǎo)的細(xì)胞的破壞有聯(lián)系,其相互作用,抑制細(xì)胞凋亡,并使細(xì)胞向惡性轉(zhuǎn)化。 4.喉癌中Survivin蛋白的表達(dá)與P53表達(dá)呈正相關(guān),提示由于P53失活而喪失了對(duì)survivin基因表達(dá)的下調(diào)作用而導(dǎo)致抗凋亡。 5.Survivi
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