浙江漢族人群ABO血型等位基因多態(tài)性的研究.pdf

1、浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文浙江漢族人群ABO血型等位基因多態(tài)性的研究姓名：祝宏申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：免疫學(xué)指導(dǎo)教師：潘建平20090401浙江大學(xué)碩上學(xué)位論文中文摘要11ABO血型表型分析：2008年79月來(lái)浙江省血液中心的隨機(jī)無(wú)償獻(xiàn)血者30519名，通過(guò)填寫(xiě)征詢表確認(rèn)其民族為漢族。12人群中ABO亞型和不規(guī)則抗體調(diào)查：2008年來(lái)浙江省血液中心的隨機(jī)無(wú)償獻(xiàn)血者，共計(jì)標(biāo)本數(shù)為167888人次。13ABO血型等位基因分布情況：標(biāo)本來(lái)自2

2、008年79月浙江省血液中心的隨機(jī)無(wú)償獻(xiàn)血者。所有標(biāo)本經(jīng)其知情同意后采集5mlEDTA抗凝血，分別吸取12ml血樣貯存在20。C以下備用。標(biāo)本總數(shù)為417例。2、血清學(xué)方法測(cè)定21ABO表型檢測(cè)：采用PK7200全自動(dòng)血型檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定ABO血清學(xué)表型，參照儀器說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。22ABO亞型鑒定：對(duì)于正反定型不一致或者疑是亞型的標(biāo)本進(jìn)行鑒定，采用試管法，具體參照中心參比實(shí)驗(yàn)有關(guān)操作說(shuō)明進(jìn)行。23不規(guī)則抗體鑒定采用凝集技術(shù)在PK7200自動(dòng)

3、血型檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)。3、標(biāo)本DNA提?。翰捎肣IAampBloodKit商用抽提試劑盒。4、ABO基因第67外顯子測(cè)序分析41PCR擴(kuò)增：PCR擴(kuò)增引物序列參照ABO基因序列，采用一對(duì)引物對(duì)進(jìn)行57外顯子擴(kuò)增，PCR引物序列和擴(kuò)增條件參照正文，擴(kuò)增反應(yīng)體系總體積為25I，tl。42PCR產(chǎn)物純化：每孔中加入核酸外切酶Ilp1(5U)，蝦堿性磷酸酶2pl(2U)，ABI公司的9700型PCR自動(dòng)擴(kuò)增儀進(jìn)行酶切反應(yīng)，37。C60min，80。

4、C15min。43測(cè)序反應(yīng)：分別針對(duì)外顯子6、7設(shè)計(jì)四個(gè)測(cè)序引物，以純化PCR產(chǎn)物為模板按BigDyeSequencingkit(ABI公司)試劑盒操作進(jìn)行測(cè)序反應(yīng)，ABI公司9700型PCR自動(dòng)擴(kuò)增儀擴(kuò)增，擴(kuò)增條件為95“C預(yù)變性5min，95。C10s，50。C10s，60℃4min，25個(gè)循環(huán)，冷卻至4℃。44測(cè)序反應(yīng)純化和電泳分析：采用乙醇／醋酸鈉法純化，然后在ABI3730測(cè)序儀上進(jìn)行測(cè)序電泳分析。45測(cè)序結(jié)果分析和判斷：Se