光學(xué)離焦和形覺剝奪致幼恒河猴實(shí)驗(yàn)性近視的中樞機(jī)制研究.pdf

1、2001級(jí)博士學(xué)位論文光學(xué)離焦和形覺剝奪致幼恒河猴實(shí)驗(yàn)性近視的中樞機(jī)制研究光學(xué)離焦和形覺剝奪致幼恒河猴實(shí)驗(yàn)性近視的中樞機(jī)制研究中山大學(xué)中山眼科中心專業(yè):博士研究生:導(dǎo)師:眼科學(xué)吳君舒葛堅(jiān)教授摘要近視是最常見的眼科疾病之一，它在人群中尤其是青少年中的發(fā)病率有逐漸增高的趨勢(shì)，在某些亞洲國家和地區(qū)如新加坡、香港和臺(tái)灣，學(xué)齡兒童近視的發(fā)病率可高達(dá)60%80%，在我國，青少年近視的患病率約為50%70%，因此，如何有效防治青少年近視己經(jīng)成為一個(gè)1

2、待解決的社會(huì)問題，這也使得對(duì)近視發(fā)生機(jī)理的研究成為全球關(guān)注的熱點(diǎn)。雖然對(duì)近視發(fā)生機(jī)理的探索己逾兩百年，人們對(duì)近視的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸也有了一定的了解，但尚存在一些局限性:(1)以往的研究多采用雞、貓、樹鼠等動(dòng)物建立實(shí)驗(yàn)性近視模型，但由于這些動(dòng)物與人類親緣關(guān)系相對(duì)較遠(yuǎn)，且其眼球與高級(jí)視中樞的結(jié)構(gòu)功能與人類差別較大，因此用這些動(dòng)物建立近視模型并非最佳選擇(2)目前己有的對(duì)近視機(jī)制的研究絕大多數(shù)是對(duì)眼球本身—鞏膜、脈絡(luò)膜、視網(wǎng)膜進(jìn)行的，而對(duì)于視

3、覺傳導(dǎo)通路的高級(jí)中樞—視皮層在近視發(fā)生發(fā)展中的作用的研究則少有涉足。本研究主要圍繞這兩個(gè)問題，選用與人類親緣關(guān)系較近的高級(jí)靈長類動(dòng)物幼恒河猴為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，通過光學(xué)離焦及形覺剝奪兩種方法誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)性近視，并進(jìn)一步探討幼恒河猴實(shí)驗(yàn)性近視的中樞調(diào)控機(jī)制，以期為研究人類近視的發(fā)生機(jī)制及臨床實(shí)際工作中防治近視提供一定的理論基礎(chǔ)。2001級(jí)博士學(xué)位論文光學(xué)離焦和形覺剝奪致幼恒河猴實(shí)驗(yàn)性近視的中樞機(jī)制研究Slit2的表達(dá)特點(diǎn)。方法:對(duì)照組動(dòng)物戴鏡滿12周

4、后，分別采用兩種不同的方法取材:(1)麻醉后由主動(dòng)脈插管灌注冷生理鹽水500m14%多聚甲醛1000m1，開顱取枕葉視皮質(zhì)，再經(jīng)4%多聚甲醛后固定，5%15%30%蔗糖梯度脫水(2)麻醉后由主動(dòng)脈插管灌注冷生理鹽水500m1后直接迅速處死，取新鮮視皮質(zhì)，置于液氮中保存。前者所取標(biāo)本作連續(xù)冰凍冠狀切片，分別用DAB顯色的免疫酶細(xì)胞化學(xué)染色和免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色方法檢測(cè)該組動(dòng)物初級(jí)視皮層(V1區(qū))中兩種即刻早基因Egrlcfos，蛋白激酶P

5、KCa，谷氨酸脫狡酶GAD“和一種神經(jīng)生長導(dǎo)向因子Slit2陽性標(biāo)記細(xì)胞的分布與數(shù)量，后者所取標(biāo)本提取蛋白質(zhì)，用Westernblot方法檢測(cè)該組動(dòng)物視皮層中以上五種因子蛋白產(chǎn)物的表達(dá)含量。結(jié)果:免疫組化染色結(jié)果顯示Egr1在正常正視化猴初級(jí)視皮質(zhì)(V1區(qū))各層細(xì)胞中的表達(dá)存在差別，在第23層，4C層和第6層，Egr1染色陽性神經(jīng)元密度較大，第5層中密度較稀疏cfos陽性染色神經(jīng)元主要分布于V1區(qū)的第4C層和第6層，其次分布于第23層，

6、第5層分布較少PKCa陽性染色神經(jīng)元主要分布于V1區(qū)的第2層，第4C層和第6層，其次分布于第3層，第5層分布較少GAD6，陽性染色神經(jīng)元主要分布于V1區(qū)的第3層下部，第4B4C層和第6層:Siit2陽性染色神經(jīng)元主要分布于V1區(qū)的第4C層和第6層，其次為第23層，第5層中陽性染色細(xì)胞較少。Westernblot檢測(cè)結(jié)果顯示Egr1cfosPKCaGAD65Slit2在正常正視化幼恒河猴視皮質(zhì)中均有特異性表達(dá)。結(jié)論:Egr1cfosPKC

7、aGAD65Slit2在正常正視化幼恒河猴的視皮質(zhì)中有特異表達(dá)，提示這幾種因子可能參與了幼恒河猴的正視化過程。第三部分視皮質(zhì)對(duì)幼恒河猴實(shí)驗(yàn)性近視的可能調(diào)控機(jī)制目的:觀察視皮質(zhì)是否參與光學(xué)離焦和形覺剝奪所致幼恒河猴實(shí)驗(yàn)性近視的發(fā)生和發(fā)展，初步探討幼恒河猴實(shí)驗(yàn)性近視的可能中樞機(jī)制。方法:AB兩組動(dòng)物戴鏡滿12周后，每組均分別采用兩種不同的方法取材，具體方法見第二部分。前者所取標(biāo)本作連續(xù)冰凍冠狀切片，分別用DAB顯色的免疫酶細(xì)胞化學(xué)染色和免疫