登革3型病毒prME和NS1多基因重組質(zhì)粒DNA免疫原性增強(qiáng)效果觀察.pdf

1、DNA疫羈可以刺激動(dòng)物產(chǎn)生體液免疫和細(xì)胞免疫.但是通常DNA疫苗的免疫原性較弱.將多種DNA疫苗混合后共同免疫將提供針對(duì)多種抗原表位的免疫應(yīng)答,并有可能提高疫苗的免疫原性.該研究采用RT-PCR法獲得了登革3型病毒的prME和NS1基因片段,分別將其插入真核表達(dá)載體pcDNA6/V<,5>·His-B,C,構(gòu)建了兩個(gè)真核表達(dá)重組質(zhì)粒.將構(gòu)建的重組質(zhì)粒DNA分別轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞后用免疫熒光法可檢測(cè)到外源蛋白的表達(dá).然后將兩種重組質(zhì)粒DNA以混

2、合及單獨(dú)形式分別免疫BALB/C小鼠,免疫的小鼠可產(chǎn)生中和抗體和特異性CTL.在末次免疫后第33天,雙質(zhì)粒重組DNA組與prME重組質(zhì)粒DNA組的中和抗體水平均可達(dá)到1:32.在末次免疫后第41天,當(dāng)效靶比為40:1時(shí),雙質(zhì)粒重組DNA免疫組的特異性CTL殺傷率為15％,而兩個(gè)單質(zhì)粒DNA組分別為10.9％和12.4％.在進(jìn)一步對(duì)所構(gòu)建的登革3型病毒prME和NS1基因重組質(zhì)粒DNA及其混合質(zhì)粒DNA的免疫保護(hù)作用進(jìn)行評(píng)價(jià)中,由于無(wú)合適

3、的小鼠模型,該研究通過(guò)采用觀察免疫小鼠血清中中和抗體水平的變化進(jìn)行評(píng)估.將不同的重組質(zhì)粒DNA免疫小鼠后用登革3型病毒進(jìn)行攻擊,分別檢測(cè)中和抗體的產(chǎn)生情況.在病毒攻擊前3天,prME和NS1基因雙質(zhì)粒DNA免疫組與prME基因重組質(zhì)粒DNA免疫組的中和抗體滴度均為1:4.在攻擊病毒后第4和8天,雙質(zhì)粒DNA組的中和抗體滴度分別為1:8和1:4.在攻毒后第15和22天,雙質(zhì)粒DNA組中和抗體上升到1:8和1:16.說(shuō)明雙質(zhì)粒DNA組誘發(fā)的

4、中和抗體在攻毒后可再次升高.而單一的prME重組質(zhì)粒DNA組在攻毒后第4天中和抗體水平從攻毒前的1:4上升到1:32.說(shuō)明單一的prME重組質(zhì)粒DNA可在攻毒后使小鼠誘生中和抗全的能力大幅提高.由于登革3型病毒的prME基因編碼結(jié)構(gòu)蛋白,其重組質(zhì)粒DNA免疫小鼠可誘導(dǎo)產(chǎn)生中可抗體,而非結(jié)構(gòu)蛋白NS1基因的重組質(zhì)粒DNA主要誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞免疫.上述結(jié)果表明,prME和NS1雙質(zhì)粒DNA免疫組誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生中和抗體的水平與單一prME重組質(zhì)粒D