大鼠頜下腺細胞與含IGF-I的絲素——殼聚糖支架體外復合培養(yǎng)的實驗研究.pdf

1、目的:
　　 探討含有胰島素樣生長因子-1(IGF-I)的絲素-殼聚糖支架(Silk fibroin-chitosanscaffold)對大鼠頜下腺細胞(Rat submandibular gland cells RSGCs)粘附、增殖、分泌作用的影響，為進一步構建功能性的頜下腺組織提供依據(jù)。
　　 方法:
　　 體外組織塊法原代培養(yǎng)1-3天齡Wistar大鼠的頜下腺細胞，免疫組織化學法鑒定、胰酶消化法和差速貼壁

2、法純化、傳代擴增。
　　 采用凍干技術制作含有IGF-I的絲素-殼聚糖支架用作實驗組，不含IGF-I的絲素-殼聚糖支架用作對照組。支架的規(guī)格統(tǒng)一為5mm×5mm×5mm，其中用作實驗組的每個支架含IGF-I濃度為10ng/ml。
　　 將濃度為5.0×106/ml的第二代大鼠頜下腺細胞懸濁液接種于含有IGF-I的絲素-殼聚糖支架為實驗組進行培養(yǎng)；將濃度為5.0×106/ml的第二代大鼠頜下腺細胞懸濁液接種子不含IGF-I

3、的絲素-殼聚糖支架為對照組進行培養(yǎng)。
　　 于接種后的2h、4h、8h、12h、24h測定實驗組和對照組的大鼠頜下腺細胞的粘附率，免疫熒光觀察細胞在支架上的粘附情況。MTT法檢測接種后1d、3d、5d、7d、9d實驗組和對照組的大鼠頜下腺細胞增殖情況。掃描電鏡觀察接種后1d、3d、5d大鼠頜下腺細胞在支架上生長的超微結構。測定1d-9d培養(yǎng)復合物上清液中淀粉酶含量，檢測實驗組和對照組的大鼠頜下腺細胞分泌功能。采用SPSS for

4、windows13.0統(tǒng)計分析軟件對結果進行方差分析，檢驗水準α=0.05，P＜0.05有統(tǒng)計學意義。
　　 結果:
　　 1、成功將純化擴增的大鼠頜下腺細胞與含IGF-I的絲素-殼聚糖支架和不含IGF-I的絲素-殼聚糖支架復合培養(yǎng)。
　　 2、細胞粘附率檢測：實驗組粘附率高于對照組，2h、24h時P＞0.05;4h、8h、12h時P＜0.05。
　　 3、免疫熒光檢測：Hoechst染色觀察，RSGCs

5、與支架復合培養(yǎng)2h，實驗組支架上可見細胞藍色熒光，對照組偶見；24h時兩組支架上布滿藍色細胞熒光，實驗組略多于對照組。
　　 4、細胞增殖結果顯示（MTT法）：接種后1d，實驗組細胞數(shù)量略大于對照組（P＞0.05），而3d-9d，兩組支架上的細胞數(shù)量有顯著性差異(P＜0.05)，實驗組優(yōu)于對照組。
　　 5、細胞上清液中淀粉酶含量檢測：兩組大鼠頜下腺細胞上清液的淀粉酶分泌量均有不同程度的增加，從3d-9d實驗組優(yōu)于對照組

6、，淀粉酶含量差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　 6、掃描電子顯微鏡觀察：絲素-殼聚糖支架呈海綿狀結構，植入初期大鼠頜下腺細胞成圓形，散在的粘附于絲素-殼聚糖支架網(wǎng)孔內，實驗組突起較少，對照組幾乎沒有突起；隨著時間的延長，實驗組大鼠頜下腺細胞呈多角形、帶有多個突起，細胞表面凹凸不平，對照組突起和細胞表面凸凹不平?jīng)]有實驗組明顯。
　　 結論:
　　 含IGF-I的絲素-殼聚糖支架對大鼠的頜下腺細胞的粘附、增殖、