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1、目的:本文在QA損傷大鼠紋狀體所導(dǎo)致的病理模型上,就NF-κB在大鼠腦內(nèi)NSCs的增殖和分化中所起到的作用進(jìn)行研究,并初步研究自噬在該過程中的作用。 方法:采用紋狀體注射QA(60 nmol)的方法建立腦損傷的病理模型,腦損傷后第六天在大鼠的損傷同側(cè)側(cè)腦室中注射NF-κB抑制劑SN50(10 nmol/ul)或者生理鹽水,并且每隔8小時在大鼠腹腔注射一次BrdU(50 mg/kg),第七天進(jìn)行灌流固定。用4%多聚甲醛后固定6-9
2、小時后依次用20%和30%的蔗糖脫水過夜直至腦組織下沉至容器底部,然后在恒冷切片機(jī)上切片(20μm),貼在明膠處理過的載玻片上。我們分別用尼氏染色和免疫組織化學(xué)染色法檢測模型的成敗及NSCs的增殖情況:用免疫熒光雙標(biāo)的方法檢測NF-κB(p65)及其抑制劑SN50對NSCs的增殖與分化的影響;通過檢測自噬蛋白(LC3)的表達(dá)情況來觀察自噬在其中的作用。并從同樣的動物模型中提取其紋狀體組織,用Western blot法檢測自噬相關(guān)蛋白的表
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