間充質(zhì)干細(xì)胞膜微粒對(duì)阿霉素誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷的影響.pdf

1、目的:
　　觀察間充質(zhì)干細(xì)胞膜微粒對(duì)阿霉素誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷的作用。
　　方法:
　　原代分離Wistar大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞并進(jìn)行培養(yǎng)，流式細(xì)胞學(xué)分析其表面標(biāo)記，分化功能實(shí)驗(yàn)鑒定其成骨和成脂肪能力。在低氧低營(yíng)養(yǎng)條件下培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞72小時(shí)，以誘導(dǎo)細(xì)胞釋放膜微粒。將培養(yǎng)上清液超速離心收獲膜微粒，測(cè)定膜微粒的蛋白濃度，并通過(guò)流式細(xì)胞儀分析和電鏡觀察，對(duì)收獲膜微粒進(jìn)行鑒定。培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞，建立阿霉素?fù)p傷模型，以正常心肌

2、細(xì)胞為對(duì)照（A組），觀察在不同濃度膜微粒作用12小時(shí)后，心肌細(xì)胞自主節(jié)律和培養(yǎng)上清LDH和SOD濃度，以判定膜微粒對(duì)心肌細(xì)胞的保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)分組B-F依次為:B組(0)，C組（1μg/ml），D組(5μg/ml)，E組（10μg/ml）和F(20μg/ml)。
　　結(jié)果:
　　1.分離培養(yǎng)的骨髓貼壁細(xì)胞呈成纖維細(xì)胞樣，表達(dá)CD29，CD44抗原，不表達(dá)CD4，CD31和CD45，且具有體外成骨和成脂肪能力，符合間充質(zhì)干細(xì)胞的

3、標(biāo)準(zhǔn);
　　2.超速離心收獲的膜微粒為中空的圓形膜狀結(jié)構(gòu)，直徑為100nm左右，表達(dá)表達(dá)CD29，CD44抗原，不表達(dá)CD31和CD45，鑒定為間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的膜微粒;
　　3.與A組比較，B組心肌細(xì)胞跳動(dòng)頻率顯著減低(P＜0.05)，培養(yǎng)基LDH和SOD濃度顯著增高(P＜0.05)，證實(shí)模型成功;
　　4.隨著膜微粒濃度的增加，心肌細(xì)胞跳動(dòng)頻率明顯減慢(P＜0.05)，至5μg/ml（D組）時(shí)達(dá)到最低值;