神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓背角NF-κB及其下游相關因子表達的實驗研究.pdf

1、目的:觀察大鼠脊髓背角中NF-κB及其下游相關因子TNF-α、iNOS在坐骨神經(jīng)慢性壓迫性損傷(CCI)疼痛模型中表達的變化規(guī)律。
　　 方法:健康雄性SD大鼠104只,體重220～280g,隨機分為手術組(CCI組)和假手術組(Sham組)(n=52),CCI組采用結扎坐骨神經(jīng)干的方法建立坐骨神經(jīng)慢性壓迫性損傷(CCI)模型,而Sham組僅暴露坐骨神經(jīng)干,不予結扎。于CCI前1d、CCI后1、4、7、14、21d各時間點測定機

2、械痛閾及熱痛閾后立即處死大鼠,取腰髓,采用Western blot檢測NF-κB的表達水平;采用實時熒光定量PCR.和免疫熒光雙標的方法分別測定NF-κB、TNF-α和iNOS的mRNA含量和蛋白表達。
　　 結果:
　　 1.行為學變化:CCI組大鼠術側熱痛閾及機械痛閾在術后第1d開始出現(xiàn)下降(P<0.05),分別于術后4d和7d痛閾下降達到最低(P<0.01),以后逐漸恢復,但至21d仍處于較低水平(P<0.05)。

3、
　　 2.Western blot檢測NF-κB的表達水平:CCI組大鼠術側脊髓中NF-κB表達于術后4～7d顯著增高,而CCI組健側及Sham組術側脊髓未有明顯變化。
　　 3.實時熒光定量PCR分別測定NF-κB、TNF-α和iNOS的mRNA表達:NF-κB和TNF-αmRNA水平于CCI后4 d開始增加(P<0.05),7 d達到高峰(P<0.01),隨后TNF-α迅速下降,而NF-κB于CCI后21天仍維持于

4、較高水平(P<0.05)。CCI組大鼠術側脊髓中NF-κB水平和TNF-α的表達增加,明顯高于對側和Sham組,而iNOS于各組脊髓中的表達未見明顯變化。
　　 4.免疫熒光雙標檢測NF-κB、TNF-α和iNOS的蛋白表達:術后第7天的免疫熒光雙標顯示NF-κB和TNF-α在術側脊髓背角存在共定位表達,與sham組相比,CCI組術側脊髓背角可見大量的雙標陽性細胞,而在CCI組和sham組中均未發(fā)現(xiàn)有明顯的iNOS陽性細胞表達。