山羊GDF9基因的克隆及外顯子多態(tài)性研究.pdf

1、GDF9屬于TGF-β超家族成員，是由卵母細(xì)胞分泌的一種生長(zhǎng)分化因子，以旁分泌的形式調(diào)控卵泡細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化，并對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞、膜細(xì)胞的生長(zhǎng)和孕酮生成起重要作用。同TGF-β超家族其他成員一樣，GDF9也是通過單跨膜的與Ser/Thr激酶偶聯(lián)的受體介導(dǎo)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，最終信號(hào)入核調(diào)控卵泡細(xì)胞基因表達(dá)。因此，GDF9被視為影響哺乳動(dòng)物繁殖性能的主要候選基因。 實(shí)驗(yàn)選用濟(jì)寧青山羊145只，魯北白山羊60只，萊蕪黑山羊60只作為實(shí)驗(yàn)材料。選

2、取GDF9基因作為影響其繁殖性能的候選基因，對(duì)這一基因進(jìn)行克隆測(cè)序，并對(duì)其外顯子進(jìn)行PCR-SSCP和RFLP分析和序列比對(duì)，對(duì)所發(fā)現(xiàn)的多態(tài)位點(diǎn)進(jìn)行分析，以期尋找出各品種山羊中的優(yōu)勢(shì)基因型，為山羊的遺傳育種提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。所得結(jié)果如下： 1.根據(jù)綿羊GDF9基因外顯子序列設(shè)計(jì)引物，應(yīng)用PCR和RACE技術(shù)進(jìn)行山羊GDF9基因的擴(kuò)增。擴(kuò)增的基因全長(zhǎng)為4715bp，包含有兩個(gè)外顯子和一個(gè)內(nèi)含子，并已經(jīng)提交NCBI Gen Ban

3、k(登錄號(hào)：EF446168)。同綿羊GDF9基因序列相比，同源性為98％。 2.采用PCR-SSCP和PCR-RFLP技術(shù)對(duì)山羊GDF9基因兩個(gè)外顯子進(jìn)行多態(tài)性分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在第一外顯子的1956位點(diǎn)和第二外顯子的3855和4085位點(diǎn)均存在多態(tài)位點(diǎn)。進(jìn)一步的測(cè)序結(jié)果表明，1956位點(diǎn)發(fā)生了由A→C的突變，3855和4085位點(diǎn)分別發(fā)生了由A→C和G→A的突變。1956位點(diǎn)的突變并沒有引起所編碼的氨基酸的變化，3855和40

4、85位點(diǎn)的突變則分別導(dǎo)致了所編碼的氨基酸由Pro→Gin和Ile→Val的改變。 3.對(duì)三種山羊外顯子進(jìn)行基因型和多態(tài)性分析顯示，對(duì)于E1-2片段，在三種山羊品種中均檢測(cè)到了AA，AC和CC基因型，并均以AA型居多，在3個(gè)山羊群體中，A等位基因頻率明顯高于T等位基因頻率。魯北白山羊?yàn)榈投榷鄳B(tài)。而萊蕪黑山羊和濟(jì)寧青山羊?yàn)橹卸榷鄳B(tài)。對(duì)于E2-3片段，在三個(gè)山羊品種中均檢測(cè)到了AA，AC和CC基因型，魯北白山羊，萊蕪黑山羊均以AA型居