乙肝后肝癌發(fā)生過程中生長抑素受體演變及相關(guān)因素研究.pdf

1、原發(fā)性肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是常見的惡性腫瘤，而我國80％～90％的HCC患者為乙肝病毒(hepatitis B virus，HBV)感染導(dǎo)致。HCC預(yù)后極差，尋找有效的全身治療方案對改善患者生活質(zhì)量、延長生存期有積極意義。 探究SSTR各亞型及COX-2在乙肝后肝癌發(fā)生發(fā)展中的演變規(guī)律，陽性表達(dá)率及表達(dá)量，SSTR與HBX表達(dá)的相關(guān)性，SSTR與甲胎蛋白(alpha-fetoprote

2、in，AFP)表達(dá)的相關(guān)性等問題，將有利于解釋療效差異、顯效幾率及用藥時(shí)機(jī)等藥理及臨床問題，并為選擇適合用藥的患者提供有益信息。 本研究旨在回答下列問題： 1．從正常肝→慢性肝炎→肝硬化→癌前病變→HCC，這一常見肝病病理發(fā)展過程中，人體肝組織SSTR1～5亞型表達(dá)經(jīng)歷了怎樣的演變過程? 2．SSTR1～5亞型在乙肝后HCC患者的腫瘤組織中陽性表達(dá)率及表達(dá)量是多少? 3．乙肝后HCC患者腫瘤組織中HBX的

3、表達(dá)是否會(huì)影響SSTR1～5亞型的表達(dá)? 4．從肝硬化→癌前病變→HCC的發(fā)展過程中，患者肝組織中COX-2表達(dá)經(jīng)歷了怎樣的演變過程?COX-2與SSTR表達(dá)之間是否有相關(guān)性?何時(shí)為SSTA與選擇性COX-2抑制劑單獨(dú)或聯(lián)合用藥的最佳時(shí)期? 5．HCC患者血AFP水平與腫瘤組織中SSTR表達(dá)之間是否有相關(guān)性?血AFP水平能否間接反映腫瘤中SSTR表達(dá)水平，進(jìn)而用于篩選適合SSTA治療的HCC患者? 方法：

4、 1. 逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)檢測各種人肝組織中SSTR1～5亞型mRNA表達(dá)。 2．DNA側(cè)序法檢測人SSTR1～5亞型RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物特異性。 3．免疫組化(immunohistochemistry，IHC)法檢測各種人肝組織中SSTR1～5亞型蛋白表達(dá)。 4．放射免疫法(radioimmunoa

5、ssay，RIA)檢測各種人肝組織中SST含量。 5．免疫組化法檢測各種人肝組織中HBX蛋白表達(dá)。 6．Western blot法檢測各種人肝組織中COX-2蛋白表達(dá)。 7. 酶聯(lián)免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測HCC患者腫瘤組織及外周血中AFP水平。 結(jié)果： 1. 各種人體肝組織中均有SSTR1～5 mRNA表達(dá)，其陽性率依次為：正常肝

6、組織(5例)20.0～80.0％；慢性肝炎組織(14例)57.1～85.7％；肝硬化組織(40例)60.0～92.5％；癌旁肝組織(40例)90.0～97.5％；肝癌組織(40例)62.5～87.5％。呈正常肝<慢性肝炎<肝硬化<癌旁組織>肝癌趨勢，P<0.05。 2.人SSTR1～5亞型RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)側(cè)序鑒定及基因比對，顯示同源性96％～100％，特異性高。 3.各種人體肝組織中SSTR1～5蛋白陽性率及表達(dá)量

7、(IOD值)依次為：正常肝組織(5例)20.0～60.0％，0.13～0.81；慢性肝炎組織(14例)42.9-71.4％，1。02～4.41；肝硬化組織(40例)47.5～67.5％，1.93～5.15；癌旁肝組織(40例)85.0-95.0％，23.57～32.56；肝癌組織(40例)47.5～70.0％，5.93～10.13。呈正常肝<慢性肝炎<肝硬化<<癌旁肝>肝癌趨勢，P<0.05。 4.SSTR1～5陽性染色見于肝細(xì)

8、胞胞膜及胞漿中，在正常肝、慢性肝炎及肝硬化組織中呈“散在無規(guī)律”分布；而在癌旁肝組織中，SSTRs表達(dá)迅速增強(qiáng)，并呈現(xiàn)“圍門脈分布”特征，在單個(gè)肝細(xì)胞上亦呈現(xiàn)“向門脈側(cè)”表達(dá)現(xiàn)象，且離腫瘤區(qū)越近越明顯。 5.正常肝、慢性肝炎及肝硬化組織中血管上SSTRs表達(dá)極少；癌旁肝組織中血管上SSTRs表達(dá)率明顯增加，且離腫瘤區(qū)越近越明顯，表達(dá)部位為門脈系統(tǒng)血管內(nèi)皮的胞膜上，中央靜脈及肝動(dòng)脈上未見表達(dá)。 6.從肝硬化到癌旁肝組織，S

9、STR1～5表達(dá)與COX-2表達(dá)呈直線負(fù)相關(guān)，r依次為-0.802、-0.897、-0.822、-0.870、-0.885，P<0.05；從癌旁肝到肝癌組織，SSTR1～5表達(dá)與COX-2表達(dá)呈直線正關(guān)，r依次為0.531(P>0.05)、0.789、0.617、0.713、0.735，P<0.05。 7.40例HCC患者中，血AFP陽性29例，陰性11例。相關(guān)分析顯示，肝癌患者血AFP水平與腫瘤組織中AFP表達(dá)量呈顯著直線正相

10、關(guān)(r=0.938，P<0.01)，即血AFP水平隨腫瘤組織中AFP表達(dá)的增加而升高。 8.多項(xiàng)式曲線擬合分析顯示，人肝癌組織中SSTR1～5表達(dá)量與癌組織中AFP表達(dá)量在二次曲線時(shí)具有最高擬合適度，二者呈二次曲線正相關(guān)關(guān)系(r依次為0.786、0.901、0.841、0.845、0.904，P<0.05)。腫瘤組織AFP水平過高或過低，都降低了SSTRs表達(dá)。 9.多項(xiàng)式曲線擬合分析顯示，人肝癌組織中SSTR1～5表達(dá)

11、量與血AFP水平在二次曲線時(shí)具有最高擬合適度，二者呈二次曲線正相關(guān)關(guān)系(r依次為0.882、0.901、0.877、0.854、0.903，P<0.05)。血AFP水平過高或過低，都伴隨著肝癌組織中SSTRs的低水平表達(dá)。 10.SSTR1～5表達(dá)高坪區(qū)(50％CI)對應(yīng)的血AFP水平分別為200～600ng/ml、300～800 ng/ml、200～600 ng/ml、200～800 ng/ml、200～800ng/ml。

12、 結(jié)論： 1.在正常成人肝組織中SSTRs呈極微量、不具組織學(xué)分布特征的表達(dá)，提示這一負(fù)性增殖調(diào)控機(jī)制并不參與抑制正常肝細(xì)胞增殖。 2.從正常肝→慢性肝炎→肝硬化的發(fā)展過程中，肝細(xì)胞經(jīng)歷了有序性代償再生→無序性代償再生，此時(shí)SSTRs表達(dá)呈相對低水平的緩慢上升，表明肝細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞增殖周期的同時(shí)也啟動(dòng)了SST-SSTRs這一負(fù)性增殖調(diào)控機(jī)制。 3．在肝癌癌前病變階段，SSTRs的峰值表達(dá)狀態(tài)、向門脈表達(dá)現(xiàn)象、S

13、ST-SSTRs復(fù)合物的胞吞和再循環(huán)現(xiàn)象突出等均提示，此時(shí)90％左右的肝細(xì)胞以其最大的努力啟動(dòng)SST-SSTRs這一負(fù)性增殖調(diào)控機(jī)制以調(diào)整自身增殖異常?？梢奡ST-SSTRs是機(jī)體重要的腫瘤負(fù)性調(diào)控元件。 4．SSTR2、5亞型在癌前病變區(qū)的顯著上調(diào)，不僅可用于臨床上鑒別癌前病變與肝硬化，更為SSTA用于抵御癌前病變惡化提供了可能，此時(shí)為SSTA治療的最佳階段，故對有癌前病變的患者，估計(jì)90％左右的患者可從SSTA治療中獲益。

14、 5．肝細(xì)胞癌變后，變異的細(xì)胞基因組削弱了SSTRs這一負(fù)性增殖調(diào)控力量，降低幅度達(dá)10～30％，這更加速了腫瘤惡性增殖。 6．在肝癌發(fā)生發(fā)展過程中SST水平與SSTRs表達(dá)量在各階段呈平行關(guān)系，除了提示這些病理狀態(tài)下上調(diào)的SSTRs有充分的配體予以激活外，還說明了與SST產(chǎn)生或代謝有關(guān)的肝外因素也協(xié)同參與了抑制肝癌發(fā)生的過程。 7．從直接抑制HCC的角度，約60％的肝癌患者可為SSTA治療的適宜者。而40％的HC

15、C組織無SSTRs表達(dá)，且進(jìn)展期肝癌SSTR表達(dá)量明顯降低，故SSTA對這部分患者可能無效或微效。這可能正是SSTA在肝癌患者中呈現(xiàn)不同療效的重要原因。估計(jì)SSTA治療HCC的有效率約為60％。 8．HBX在肝癌及癌前病變(癌旁)區(qū)的高量表達(dá)，進(jìn)一步證實(shí)了HBX與HCC發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。 9．在人體內(nèi)HBX對SSTRs的表達(dá)沒有明顯影響，約60％的乙肝后HCC患者腫瘤組織中有SSTRs表達(dá)，這為SSTA治療提供了作用基礎(chǔ)

16、。 10．在肝硬化→癌前病變(癌旁)→肝癌續(xù)貫發(fā)生過程中，COX-2表達(dá)逐漸降低的現(xiàn)象展示了慢性炎癥向癌癥發(fā)展的重要信號，故COX-2抑制劑的抗增殖效應(yīng)越早期越好。 11．癌前病變及HCC早期，為SSTA及選擇性COX-2抑制劑協(xié)同作用的最佳時(shí)機(jī)。 12．HCC患者外周血AFP水平隨腫瘤組織中AFP表達(dá)的升高而升高。 13．HCC患者腫瘤組織中AFP水平過高或過低，都降低了腫瘤組織SSTRs表達(dá)。