腫瘤靶向載阿霉素超聲敏感納米泡的研究.pdf

1、為解決微米級超聲造影劑只能進行腫瘤血管內(nèi)成像或治療及現(xiàn)存納米級超聲造影劑成像效果差、不能治療的問題，本課題在微泡及納米泡超聲造影劑研究基礎上，進行了腫瘤靶向超聲敏感納米泡的研究。 首先進行成膜材料聚乳酸-羥基乙酸聚乙二醇單甲醚共聚物(PLGA-PEG)的合成，并對其性質(zhì)進行考察。然后以抗腫瘤藥阿霉素(DOX)為模型藥物，具有兩親性的PLGA-PEG為成膜材料，具有氣液相變性質(zhì)(相變溫度29℃)全氟戊烷(PFP)為成像氣體，制備得

2、到載DOX納米泡，并對其體內(nèi)外行為進行考察，具體研究內(nèi)容如下： 1.成膜材料的合成以生物相容性好、可生物降解的聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)為疏水段，聚乙二醇單甲醚(mPEG)為親水段，通過選擇合適的反應條件及分離純化條件合成得到兩嵌段共聚物PLGA-PEG，并對其結(jié)構(gòu)進行確證。 2.成膜材料的性質(zhì)對PLGA-PEG的溶解性能進行了測定，其不溶于水及醇類溶劑如甲醇和乙醇等，易溶于鹵代烷烴如氯仿和二氯甲烷等，溶于四氫呋喃、乙

3、酸乙酯和丙酮。用Langmuir膜天平對PLGA-PEG單分子膜性質(zhì)進行了考察，PLGA-PEG有很好的形成單分子膜的能力，表明其有很好的兩親性。DOX(一定量三乙胺堿化)在pH=7.4 PBS表面能很好的形成單分子膜，DOX可插入到PLGA-PEG的單分子膜中，DOX與PLGA-PEG混合后形成的單分子膜有很好的靜動態(tài)穩(wěn)定性。 3.DOX膠束的制備及結(jié)構(gòu)特點建立了HPLC體外分析方法，以膠束粒徑分布、溶液外觀、載藥量、包封率等

4、為評價指標，進行了DOX膠束的制備方法選擇及處方工藝優(yōu)化，用低溫丙酮注入法制備得到了粒徑分布均勻、載藥量、包封率均較高的DOX膠束，工藝重現(xiàn)性好。負染法透射電鏡觀察其結(jié)構(gòu)為球形的以疏水區(qū)為核、親水區(qū)為殼的核-殼結(jié)構(gòu)，平均粒徑為61nm左右。 4.DOX納米泡的制備及結(jié)構(gòu)特點以納米泡粒徑分布、粒徑隨溫度變化為評價指標，進行DOX納米泡制備方法的選擇及處方工藝優(yōu)化，用超聲注入法制備得到粒徑均勻的DOX納米泡(室溫下以納米乳形式存在)

5、，工藝重現(xiàn)性好，激光粒度分析儀測其平均粒徑為168nm，光學顯微鏡觀其50℃孵育后納米泡融合形成外觀為圓形表面較紅的微泡，熒光顯微鏡觀其結(jié)構(gòu)為中空的殼—核結(jié)構(gòu)，DOX載在殼壁的疏水區(qū)。 5.DOX納米泡相關(guān)性質(zhì)考察以粒徑為評價指標對DOX的溫度敏感性、超聲敏感性、超聲合并性、超聲釋藥性、稀釋穩(wěn)定性、放置穩(wěn)定性等進行考察，結(jié)果表明DOX納米泡的粒徑能隨溫度變化而變化，納米泡在超聲下可合并成微泡，微泡在繼續(xù)超聲時可破裂快速釋放藥物，

6、且在PH=6.5 PBS中比PH=7.4 PBS中更易釋放藥物。納米泡在4℃保存短期內(nèi)穩(wěn)定性較好，稀釋50倍后粒徑不變，稀釋后在37℃pH=7.4 PBS中孵育15min DOX僅釋放0.79％，穩(wěn)定性很好。 6.DOX納米泡在動物體內(nèi)的藥代動力學和組織分布建立了小鼠右側(cè)腋窩皮下接種H22肝癌模型，建立了準確、快速、靈敏的HPLC體內(nèi)分析方法。對DOX納米泡靜脈注射后在正常鼠與荷瘤鼠體內(nèi)藥代動力學與組織分布分別進行了研究。DOX

7、納米泡在荷瘤鼠體內(nèi)半衰期(t1/2)要比正常鼠明顯短，荷瘤鼠t1/2為570±148min，而正常鼠t1/2為1019±655min。DOX納米泡在正常鼠肝臟中分布最多(2.77％)，荷瘤鼠腫瘤部位分布最多(1.11％)，在正常鼠與荷瘤鼠其余組織中均有少量分布(0～0.27％)，結(jié)合藥動數(shù)據(jù)，證明DOX納米泡有很好的腫瘤靶向性。 7.DOX納米泡荷瘤鼠藥效學建立了小鼠右側(cè)腋窩皮下接種H22肝癌模型，對DOX納米泡靜脈注射后荷瘤小