以脫細(xì)胞真皮混合構(gòu)建組織工程皮膚.pdf

1、目的：在以往組織工程皮膚的研究中，皮膚替代物的構(gòu)建均是分別接種成纖維細(xì)胞和表皮細(xì)胞，存在的問題是表皮細(xì)胞在脫細(xì)胞真皮上不易粘附，且表皮與真皮間連接不緊密，難以運用到臨床。有研究證實，成纖維細(xì)胞分泌的生長因子及細(xì)胞外基質(zhì)成分可促進(jìn)表皮細(xì)胞的遷移、增殖及分化。本實驗以此為依據(jù)，嘗試將表皮細(xì)胞與成纖維細(xì)胞混合接種，探討該方法在體外構(gòu)建復(fù)合皮的可行性。 方法：取人包皮分別進(jìn)行成纖維細(xì)胞和表皮角質(zhì)細(xì)胞的分離培養(yǎng)。在脫細(xì)胞真皮的真皮面接種成

2、纖維細(xì)胞7d后，實驗分二組進(jìn)行。實驗組：將表皮細(xì)胞按5×105/c㎡與成纖維細(xì)胞0．2×105/c㎡混合后接種于表皮面，培養(yǎng)液用K-SFM與成纖維細(xì)胞上清的1：1混合液。對照組：僅接種表皮細(xì)胞5×105/c㎡，培養(yǎng)液用K-SFM。培養(yǎng)1、3周后取材觀察其形態(tài)變化，并對培養(yǎng)3周的復(fù)合皮行免疫組化鑒定及透射電鏡觀察。 結(jié)果：采用二步酶消化法分離細(xì)胞，收集的表皮細(xì)胞及成纖維細(xì)胞數(shù)量多，且細(xì)胞活力好。取材1周的標(biāo)本，實驗組于脫細(xì)胞真皮上

3、可見融合的表皮細(xì)胞，排列緊密；對照組只見散在的表皮細(xì)胞。培養(yǎng)3周后，實驗組可見表皮層連續(xù)，細(xì)胞層數(shù)3-4層，與真皮連接緊密，有表皮腳形成；對照組表皮層僅1-2層，且與真皮分離。實驗組Laminin（++）提示基底膜形成充分，并經(jīng)透射電鏡也可觀察到完整的基底膜。 結(jié)論：經(jīng)打孔處理后的脫細(xì)胞真皮可用于組織工程皮膚的構(gòu)建。將表皮細(xì)胞與少量成纖維細(xì)胞混合接種，可促進(jìn)表皮細(xì)胞在脫細(xì)胞真皮上粘附增殖，并有助于基底膜充分形成。按此種模式構(gòu)建的