紫花苜蓿MsATG13基因的克隆及其功能研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、自噬(Autophagy)是真核生物細胞對損壞或廢棄的細胞、細胞器以及蛋白質降解和再利用的重要生理過程，能夠對細胞內物質進行周轉，對維持細胞的動態(tài)平衡以及抵抗生物和非生物脅迫起到關鍵作用。低溫嚴重影響了植物的生長發(fā)育，導致作物產(chǎn)量的下降，制約著農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的發(fā)展。本研究以紫花苜蓿(Medicago sativa L.)為材料，克隆得到MsATG13基因，將其連至表達載體pCBM，對煙草進行遺傳轉化。低溫脅迫處理后，通過生理指標的檢測，初步證

2、明ATG13基因具有抗寒功能。具體研究結果如下:
　　1.MsATG13基因的克隆與生物信息學分析
　　利用RT-PCR的方法從紫花苜蓿中克隆得到了MsATG13基因的全長cDNA，MsATG13基因的全長為1686bp，編碼561個氨基酸，并含有一個ATG13結構域。將其氨基酸序列在NCBI中BLAST分析，發(fā)現(xiàn)與MtATG13相比，氨基酸具有同源性，相似性為95％。且在ATG13結構域內有5個差異位點。
　　2.M

3、sATG13基因的植物表達載體構建
　　利用植物表達載體pCBM構建了含有MsATG13基因的重組表達載體pCBM-MsATG13，含有CaMV35S啟動子和植物草丁膦(PPT)抗性。
　　3.MsATG13基因對煙草的遺傳轉化
　　將pCBM-MsATG13質粒轉入農(nóng)桿菌EHA105中，采取農(nóng)桿菌侵染葉盤法完成對煙草的遺傳轉化。經(jīng)草丁膦篩選共得到了42株抗性植株。通過PCR的初步鑒定共得到了15株煙草陽性苗，并且通過

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