促紅細(xì)胞生成素預(yù)處理對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究促紅細(xì)胞生成素（EPO）預(yù)處理在大鼠心肌缺血再灌注損傷中的保護(hù)作用與機(jī)制。
　　 方法：84只雄性SD大鼠隨機(jī)分為3組：即正常組、缺血再灌注組（IR組）、EPO處理組（EP組）。EP組大鼠建立模型前24h腹腔注射促紅細(xì)胞生成素5000U/kg做藥物預(yù)處理，IR組建立模型前24h腹腔注射1ml生理鹽水。心臟停搏后置于4℃St.ThomasⅡ號(hào)停搏液中分別保存4h、6h、8h（各時(shí)間位點(diǎn)均為心臟6只），保存結(jié)束后制備活鼠替

2、代Langendorff模型的灌注心臟模型。測(cè)定各組心臟保存前及保存后再灌注60min的血流動(dòng)力學(xué)（HR、CF、LVDP、LVEDP、±dp/dtmax）等心功能指標(biāo)，心肌酶（LDH、CK、CK-MB）釋放量，心肌含水量。實(shí)驗(yàn)結(jié)束分別取各組左心室心肌標(biāo)本，觀察心肌常規(guī)和超微組織結(jié)構(gòu)的變化。采用缺口末端標(biāo)記（TUNEL）技術(shù)檢測(cè)各組心肌細(xì)胞凋亡率。Western blot檢測(cè)心肌組織中Caspase-3蛋白表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：

3、（1）心臟保存4h、6h、8h后再平衡灌注60min，EP組的心臟血流動(dòng)力學(xué)及心功能各項(xiàng)指標(biāo)恢復(fù)明顯優(yōu)于IR組（P<0.05或P<0.01）。（2）隨著保存延長(zhǎng)，各組血清CK、CK-MB及LDH水平逐漸升高。在各時(shí)間點(diǎn)CK、CK-MB和LDH水平，IR組高于EP組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。（3）心臟保存8h，盡管實(shí)驗(yàn)組心功能各項(xiàng)指標(biāo)有明顯下降，但心臟仍全部復(fù)跳，IR組有3只心臟不能復(fù)跳。（4）TUNEL法檢測(cè)結(jié)果

4、顯示：IR組及EP組凋亡指數(shù)均高于正常組，EP組心肌細(xì)胞凋亡數(shù)明顯低于IR組。（5）Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示：各組Caspase-3蛋白均有所表達(dá)，EP組Caspase-3蛋白表達(dá)量低于IR組（P<0.05），表達(dá)明顯受到抑制。（6）光鏡顯示正常組心肌纖維排列規(guī)則，細(xì)胞核結(jié)構(gòu)完整，為正常心肌組織結(jié)構(gòu)。IR組心肌纖維排列紊亂，細(xì)胞核不規(guī)則，胞漿著色深，間質(zhì)明顯水腫，有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。EP組心肌組織損傷相對(duì)較輕，心肌纖維排列較規(guī)整

5、，間質(zhì)水腫不明顯，間質(zhì)內(nèi)可見少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。EP組及IR組光學(xué)顯微鏡下心肌組織均表現(xiàn)為不同程度的心肌空泡變性，伴有灶性心肌損害，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)，衰變?cè)矫黠@。心臟保存8h后，IR組表現(xiàn)為彌漫性多類型細(xì)胞浸潤(rùn)，伴有明顯的水腫、出血和心肌壞死，EP組較對(duì)照組明顯減輕。（7）透射電鏡顯示空白組心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)基本正常，肌原纖維平行排列，肌節(jié)清晰，線粒體形態(tài)一致，呈橢圓形，細(xì)胞核結(jié)構(gòu)正常，而IR組和EP組均可見肌原纖維排列紊亂、斷

6、裂，線粒體腫脹或固縮，嵴溶解，部分線粒體空化。細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)邊集，細(xì)胞質(zhì)水腫明顯。EP組細(xì)胞結(jié)構(gòu)損傷較輕，可見肌原纖維排列較規(guī)則，無(wú)明顯溶解、斷裂，線粒體形態(tài)接近正常，核內(nèi)核仁清楚。
　　 結(jié)論：1、EPO預(yù)處理可以促進(jìn)保存心臟心功能恢復(fù)，顯著增強(qiáng)心肌收縮能力，改善順應(yīng)性。2、EPO預(yù)處理可以減輕心肌水腫、充血及滲出，血管擴(kuò)張及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，減少細(xì)胞凋亡和Caspase-3基因表達(dá)，提高心臟保存質(zhì)量，明顯減輕心肌細(xì)胞缺血再灌注損