以Aurora B激酶為靶點的高通量藥物篩選.pdf

1、惡性腫瘤是對人類生命和健康構成嚴重威脅的重大疾病之一。現(xiàn)階段，臨床上治療惡性腫瘤的方法很多，主要包括手術治療、放療（放射線治療）、化療（化學藥物治療）以及分子靶向治療等。尋找特定的藥物篩選靶點，并有針對性地開展低毒、高效、特異性強的新型抗腫瘤藥物的研發(fā)，是一種避免對其他正常的組織細胞產(chǎn)生損傷的主要研究途徑。其中，以Aurora B激酶為藥物靶點篩選抗腫瘤類藥物的研究開發(fā)，已經(jīng)成為國內(nèi)外研究的一個新熱點。
　　 Aurora B激

2、酶是一種非常保守的絲氨酸/蘇氨酸激酶，在細胞周期進程中發(fā)揮著重要的作用，諸如影響染色體分離以及胞質(zhì)分裂等。有絲分裂過程中，Aurora B激酶的調(diào)控一旦出現(xiàn)異常，將對基因組的穩(wěn)定性產(chǎn)生不良影響，容易誘發(fā)多倍體或非整倍體的產(chǎn)生，進而可能導致腫瘤的發(fā)生。近年來，研究顯示Aurora B激酶與腫瘤的發(fā)生發(fā)展存在緊密的聯(lián)系，已經(jīng)在多種人類的惡性腫瘤組織中均發(fā)現(xiàn)了Aurora B激酶呈過量表達狀態(tài)。目前，Aurora B激酶已經(jīng)被公認為抗腫瘤類藥

3、物研發(fā)的重要靶點，受到了國內(nèi)外科研機構的高度重視。
　　 本論文主要以Aurora B激酶作為藥物篩選靶點，利用原核表達系統(tǒng)體外高效地表達了有活性、可溶的人源Aurora B激酶重組蛋白，并通過進行多步分離與純化，獲得了純度達90％以上的激酶蛋白，為后續(xù)高通量藥物篩選創(chuàng)造了有利條件。在此基礎上，以AuroraB激酶重組蛋白（野生型）作為靶點，我們在分子水平上基于分光光度法建立了的高通量藥物篩選模型，并應用已知的Aurora B激

4、酶抑制劑Hesperadin對該藥篩模型進行驗證，證明了該藥篩模型的正確性，適用于高通量藥物篩選。應用該建立的藥篩模型，對小分子化合物庫進行初篩和復篩，以及抑制率的計算和假陽性的排除，發(fā)現(xiàn)了一些抑制效果較好的陽性化合物，共有16種化合物的抑制率在50％以上，其中有4種化合物的抑制率達到了80％以上。對這些篩選出來的陽性化合物，在細胞水平上利用MTT法分別檢測其對腫瘤細胞的增殖抑制程度，最終獲得了一種對腫瘤細胞的抑制效果較好化合物，可進一