鮮蒜、蒜氨酸、蒜酶定量分析方法與蒜氨酸質量標準研究.pdf

1、目的：大蒜(Allium Sativum L.)富含大量的生物活性物質和營養(yǎng)成分，目前，大量研究證明，大蒜具有殺菌、降血脂、抗血栓、預防中風和高血壓、保護肝臟和提高機體免疫力、抗癌等功能，是近代醫(yī)藥研究的熱點之一。目前公認大蒜的功效成分是蒜氨酸(Alliin，S-allyl-L-cysteine，2-烯丙基半胱氨酸亞砜)及經蒜酶(Alliinase，EC 4.4.1.4)催化裂解產生的大蒜辣素(Allicin，allyl-2-prope

2、nethiosulfinate，2-烯丙基硫代亞磺酸酯)和阿霍烯(ajoene)等含硫化合物。由于目前市場上的大蒜制劑含量低，療效差，制備工藝簡單，大多數大蒜制劑都是以保健品的方式銷售，因此按照本課題組的設計思路，利用現代生物制藥技術從大蒜中分別提取相對穩(wěn)定的蒜氨酸和蒜酶，以提取出的高純度的蒜氨酸和蒜酶作為原料，制成真正的“高效大蒜新制劑”，充分發(fā)揮療效。蒜氨酸、蒜酶作為大蒜中最主要的原始活性成分及風味物質來源，測定其含量能夠給今后的中

3、試生產提供可靠的依據。蒜氨酸、蒜酶原料藥中試生產過程中，各個檢測點的樣品分析也能提供中試生產的質量控制。最后對中試生產得到的原料藥蒜氨酸制定了質量標準(草案)及起草說明。 方法：利用HPLC對鮮蒜、蒜氨酸、蒜酶進行了定量分析方法學的研究，利用研究的結果對蒜氨酸、蒜酶中試生產的檢測點樣品進行分析，最后制定蒜氨酸質量標準(草案)及其起草說明。 結果：本文分別建立了測定鮮蒜、蒜氨酸、蒜酶的分析方法。在測定鮮蒜的蒜氨酸含量中采用

4、了外標法和內標法兩種方法，并進行了的對比；考察了適合于測定50％蒜氨酸含量的分析方法；并將以上兩種測定于美國藥典中收載的衍生化法進行了對比；建立了HPLC法測定蒜酶活力的方法： 1.鮮蒜、蒜氨酸、蒜酶的分析方法1.1鮮蒜的含量測定外標法：Hypersil BDS C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，流動相為0.04％三氟乙酸水溶液，檢測波長為UV 214 nm，流速：0.5 mL·min-1。 內標法：Water

5、s symmetry shield RP C18柱(4.6mm×250mm，5 μm)，流動相為水，檢測波長為UV 214 nm，流速：0.5mL·min-1。 1.2蒜氨酸(50％)的含量測定Hypersil BDS C18柱(4.6 mm×250 mm，5μm)，流動相為甲醇：0.02％CF3COOH水溶液(5:95)，檢測波長：UV 214 nm，流速：0.5 mL·min-1。 1.3與USP方法對比Thermo

6、 ODS柱(4.0 mm×100 mm，3μm)；流動相：0.045 mol·mL-1磷酸緩沖液：乙腈：1，4-二氧六環(huán)：四氫呋喃=69.9:25:2.9:2.2，流速：1.0 mL·min-1；檢測波長：UV 337 nm。 同樣測定鮮蒜和蒜氨酸(≥50％)樣品，結果沒有統計學差異。 1.4蒜酶活力測定Hypersil BDS C18柱(4.6mmx250 mm，5μm)，流動相為甲醇-水(55:45)，檢測波長：UV

7、214nm，流速：0.5 mL·min-1。。 2.蒜氨酸、蒜酶中試生產過程檢測點分析本文確定了，蒜氨酸中試生產檢測點的分析方法是：HPLC法，條件是HypersilBDS C18柱(4.6mmx250mm，5μm)，流動相為0.04％三氟乙酸水溶液，檢測波長為UV 214 nln，流速：0.5 mL·min-1；蒜酶中試生產檢測點的分析方法是紫外分光光度法，用丙酮酸法測定蒜酶的活力，用Bradford法測定蒜酶蛋白質含量，從而