二郎山云杉葉棲真菌群落研究.pdf

1、本研究以二郎山云杉葉棲真菌為研究對(duì)象，采用兩種表面消毒方法在不同的月份對(duì)二郎山林場(chǎng)不同海拔、不同冠層、不同葉齡的云杉針葉進(jìn)行組織分離，獲得葉棲真菌菌株168個(gè)，其中，表面消毒組獲得83個(gè)菌株，不消毒組獲得128個(gè)菌株，兩種處理檢出的重復(fù)菌株43個(gè)。運(yùn)用形態(tài)分類鑒定方法對(duì)己產(chǎn)孢的87個(gè)菌株進(jìn)行了鑒定，能夠準(zhǔn)確鑒定的菌株數(shù)為52株，分別屬于以下17個(gè)屬：Chaetomium、PestalotopsisSteyaert、Pithomyces、

2、Segazzinia、Aspergillus、Lophodermium、Penicillium、Nigrospora、Sporormiella、Monilia、Phomopsis、Papularia、Basipetospora、Verticillium、Preussia、Dictyoarthrinium、Tricladium。以改變培養(yǎng)基配方的方式對(duì)未產(chǎn)孢的81個(gè)菌株進(jìn)行誘導(dǎo)產(chǎn)孢培養(yǎng)。除5個(gè)在PDA上不產(chǎn)孢的PestalotopsisS

3、teyaert菌株產(chǎn)孢之外，其余菌株未見產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)和孢子的產(chǎn)生。 對(duì)檢出率較高，但不產(chǎn)孢或只有分生孢子未見產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)的24個(gè)菌株，進(jìn)行分子生物學(xué)技術(shù)分類鑒定。采用改良二次沉淀法獲得了24株葉棲真菌的基因組DNA，利用真菌通用引物ITS1和ITS4對(duì)這24個(gè)菌株的rDNA基因ITS區(qū)進(jìn)行了PCR擴(kuò)增，均得到特異性單一片段，所得片段大小在540～640bp之間。然后將PCR擴(kuò)增片段克隆并轉(zhuǎn)化到載體菌中，采用菌落PCR的方法篩選陽性克隆菌

4、株，最后對(duì)其進(jìn)行測(cè)序。將所得的ITS區(qū)序列分別與GenBank中的相似度高的已有序列進(jìn)行了比較，并構(gòu)建了同源樹，結(jié)果表明：供試的24個(gè)菌株中23個(gè)分屬于以下10個(gè)屬，其中4個(gè)菌株的分類地位鑒定到種，Phacidiopycnissp.、Hormonemasp.、Xylariasp.、Preussiasp.、Arthriniumsp.、Diaporthesp.、Epicoccumnigrum、Rhizosphaerakalkhoffii、N

5、eofabraeaalba、Kabatinasp.。其中兩個(gè)菌株為Rhizosphaerakalkhoffii與國(guó)外報(bào)道的云杉落針病病原菌相同，可能為二郎山云杉針葉病害疑似病原菌。 統(tǒng)計(jì)分析云杉葉棲真菌的檢出情況，結(jié)合生態(tài)學(xué)的基本原理和分析方法，對(duì)云杉葉棲真菌進(jìn)行群落學(xué)研究。發(fā)現(xiàn)其種群組成和群落多樣性都呈現(xiàn)一定的規(guī)律性。云杉葉棲真菌種群組成分析的結(jié)果表明：兩種表面消毒方法獲得的葉棲真菌的種群數(shù)量都表現(xiàn)出下冠層最多，上冠層次之，中

6、冠層最少的特點(diǎn)。上冠層和下冠層葉棲真菌的種群數(shù)量隨著葉齡的增長(zhǎng)而增長(zhǎng)，而中冠層真菌種群的數(shù)量隨葉齡變化差異不大，但也表現(xiàn)出了三年生及以上的針葉的真菌種群數(shù)略高于更小葉齡的趨勢(shì)。就所有葉棲真菌的檢出率來看，表面消毒組的真菌檢出種類少于表面不消毒組。不同采樣月份獲得真菌的種群數(shù)量以7月、9月最多，3月、5月次之，11月相對(duì)較少，1月最少。采樣點(diǎn)所處的5個(gè)海拔梯度中，云杉葉棲真菌種群數(shù)量的變化呈倒U型，即以海拔2680m為最高點(diǎn)，分別向兩端減