玉米地上部依賴NAD（P）H的鐵還原酶的分離純化研究.pdf

1、除根系鐵的吸收外，作物地上部鐵的運(yùn)輸與再循環(huán)對(duì)于作物籽粒中鐵的含量也有著重要意義。鐵還原酶在細(xì)胞內(nèi)鐵的轉(zhuǎn)運(yùn)和再分配過(guò)程中很可能起到關(guān)鍵作用，因此植物地上部鐵還原酶的研究將有助于我們改善糧食作物籽粒中鐵營(yíng)養(yǎng)狀況；另外鐵還原酶作為植物地上部鐵代謝的重要環(huán)節(jié)之一，鐵還原酶的研究將為我們理解植物地上部鐵代謝網(wǎng)絡(luò)提供基礎(chǔ)。對(duì)于鐵還原酶的研究大多集中于其在根部鐵的吸收過(guò)程中的作用，而目前關(guān)于植物地上部發(fā)揮功能的鐵還原酶的研究還比較少。 本研

2、究以重要糧食作物玉米為材料，經(jīng)過(guò)硫酸銨分級(jí)沉淀、DEAE-纖維素離子交換層析、SP-sepharose FF離子交換層析、natvie PAGE電泳、電洗脫等一系列分離純化手段，分離純化玉米地上部可溶性鐵還原酶，純化后可溶性NFR經(jīng)SDS-PAGE電泳，為一條55.6 KDa的單一蛋白條帶。同時(shí)對(duì)玉米地上部主要可溶性NFR酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)該酶最適酶促反應(yīng)pH為6.5，最適酶促反應(yīng)溫度為70℃，但在此溫度下該酶不穩(wěn)定。研究發(fā)現(xiàn)主要

3、可溶性NFR的pn穩(wěn)定范圍較寬，在pH5.6-8.2之間30℃保溫1h，仍保持90％以上酶活力；但在pH<5.0時(shí)穩(wěn)定性明顯下降。通過(guò)酶催化反應(yīng)的底物特異性試驗(yàn)表明，玉米地上部主要的NFR在NADPH為電子供體和檸檬酸鐵為電子受體時(shí)具有最大酶活性。研究還發(fā)現(xiàn)，金屬離子螯合劑EDTA和Al<'3+>、Mn<'2+>等金屬離子對(duì)該鐵還原酶活性有顯著抑制作用，而1mM的Mg<'2+> 則能明顯提高該鐵還原酶活性。 本試驗(yàn)對(duì)玉米地上部膜