普羅布考對血管性癡呆大鼠經由JNK途徑的腦保護作用.pdf

1、目的:血管性癡呆(vascular dementia，VD)指腦血管病變引起的腦損害所致的癡呆。是在Alzheimer病(AD)之后第二常見的癡呆。發(fā)病機制一般認為是腦血管病的病灶涉及額葉、顳葉及邊緣系統(tǒng)，或病灶損害了足夠容量的腦組織，導致高級認知功能的嚴重受損。目前對于VD的分子機制研究已日漸成為科學家們研究的熱點問題。主要有興奮性氨基酸毒性、膽堿能缺陷、自由基損傷、炎癥反應、神經細胞凋亡等。近年來，神經細胞凋亡與VD的關系越來越受到

2、科學家們的關注。
　　c-Jun氨基末端激酶(JNK)又稱應激激活蛋白激酶(SAPK)，是絲裂原激活的蛋白激酶(MAPKs)超家族的一員。大量實驗提示，JNK信號通路在細胞增殖、細胞凋亡、氧化應激及多種人類疾病的發(fā)生發(fā)展中扮演著重要角色。已有研究表明，應用特異性JNK抑制劑可有效地阻斷JNK信號通路從而有效地調控細胞凋亡。
　　普羅布考是一種非他汀類血脂調節(jié)藥物。目前國內外研究表明，普羅布考在AD大鼠中具有顯著的腦保護作用，

3、而其在VD中的治療鮮有報道。本實驗通過觀察VD大鼠海馬組織神經細胞的凋亡情況及JNK及P-JNK水平的變化，探討JN信號通路在VD中的作用及普羅布考對VD大鼠的腦保護作用機制，為VD的臨床治療及普羅布考的臨床應用提供依據。
　　方法:選取健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠，隨機分為假手術組、模型組、普羅布考組，每組10只，采用永久性結扎雙側頸總動脈的方法建立血管性癡呆大鼠模型。普羅布考組灌胃給予普羅布考500mg/k

4、g/d，假手術組和模型組給予等量溶劑。給藥8周后，行Morris水迷宮實驗，對各組大鼠學習記憶能力進行測試，行為學測試完畢后取材，采用流式細胞術評估海馬區(qū)神經細胞凋亡程度，用免疫組織化學方法和免疫印跡法(westernblot)測定海馬區(qū)JNK和p-JNK蛋白的表達水平。
　　結果:
　　1.行為學測定
　　1.1 逃避潛伏期結果水迷宮定位航行實驗表明，從訓練的第2天開始至結束，三組大鼠逃避潛伏期均有下降的趨勢，說明訓

5、練可以增強學習能力。各組大鼠間學習記憶能力存在差異(F=15.34，P＜0.05)，與假手術組相比，模型組與普羅布考組大鼠第1-4天的逃避潛伏期時間均明顯延長(P＜0.05);與模型組相比，普羅布考組大鼠第2-4天的逃避潛伏期時間明顯縮短(P＜0.05)，第1天無顯著差異(P＞0.05)。
　　1.2 穿越平臺次數結果第5天測定的穿越平臺次數表示大鼠的空間記憶能力，穿越平臺次數越多記憶能力越強。與假手術組相比，模型組大鼠穿越平臺次

6、數明顯減少(P＜0.05);與模型組相比，普羅布考組大鼠穿越平臺次數明顯增多(P＜0.05);普羅布考組與假手術組相比，大鼠穿越平臺次數無顯著差異(P＞0.05)。各組大鼠隨著訓練時間的推移，訓練次數的增多，尋找平臺的方式在不斷變化，尋找平臺的時間都在縮短，說明學習鍛煉可以增強空間記憶能力。
　　2.普羅布考對大鼠海馬CA1區(qū)神經細胞凋亡的影響流式細胞術細胞周期定量分析表明，假手術組未見明顯的凋亡峰，雖也有自發(fā)性細胞凋亡發(fā)生，但細

7、胞凋亡百分率很低，僅為(5.06±2.52)％;模型組細胞凋亡率為(11.27±2.67)％，較假手術組顯著增高(P＜0.05);普羅布考組細胞凋亡率為(6.57±1.47)％，較模型組顯著降低(P＜0.05);普羅布考組與假手術組相比較雖然也有一定程度的增高，但無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　3.普羅布考對大鼠海馬CA1區(qū)JNK及p-JNK蛋白表達結果的影響
　　3.1 免疫組織化學染色結果大鼠海馬CA1區(qū)p-JNK、

8、JNK蛋白表達的陽性細胞情況:假手術組和普羅布考組大鼠海馬區(qū)僅見很少的p-JNK陽性神經元。模型組部分海馬細胞體積縮小，細胞帶不連貫，可見較多的p-JNK陽性神經元。模型組與假手術組相比，模型組大鼠海馬CA1區(qū)p-JNK蛋白表達的陽性細胞數明顯增多(P＜0.05);與模型組相比，普羅布考組大鼠海馬CA1區(qū)p-JNK蛋白表達的陽性細胞數明顯減少(P＜0.05);普羅布考組與假手術組相比，大鼠海馬CA1區(qū)p-JNK蛋白表達的陽性細胞數無明顯

9、差異(P＞0.05)。三組間比較，JNK蛋白表達的陽性細胞數均無明顯差異(F=0.54，P＞0.05)。
　　3.2 western blot結果大鼠海馬p-JNK、JNK蛋白的表達水平情況:模型組與假手術組相比，模型組大鼠海馬區(qū)p-JNK蛋白表達水平明顯增高(P＜0.05);普羅布考組與模型組相比，普羅布考組大鼠海馬區(qū)p-JNK蛋白表達水平明顯降低(P＜0.05);普羅布考組與假手術組相比，大鼠海馬區(qū)p-JNK蛋白的表達水平也有

10、差異，普羅布考組顯著高于假手術組(P＜0.05)。三組間比較，大鼠海馬區(qū)JNK蛋白的表達水平均無明顯差異(P＞0.05)。
　　三組間p-JNK/JNK值的比較:模型組與假手術組相比，模型組大鼠海馬區(qū)p-JNK/JNK值明顯增高(P＜0.05);普羅布考組與模型組相比，普羅布考組大鼠海馬區(qū)p-JNK/JNK值明顯降低(P＜0.05);普羅布考組與假手術組相比，大鼠海馬區(qū)p-JNK/JNK值略增高，但差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)