血紅素結合蛋白在腦出血后腦水腫形成中作用的研究.pdf

1、 目的：通過在SD大鼠腦內立體定向注射去除或外加血紅素結合蛋白(Hx)后的自體全血制作腦出血(ICH)模型,觀察Hx與血腫周圍腦組織含水量、血腫中血紅素(He)及其代謝產物含量變化、血腫周圍腦組織的炎癥反應和自由基形成的關系,探討Hx在ICH后腦水腫形成中的作用及機制。方法 1.分組：100只SD大鼠隨機分為4組,即假手術組、ICH對照組、Hx去除組、Hx干預組,每組25只,分5個觀察時間點,分別為手術后1d、3d、7d、14d、21

2、d,每個時間點均為5只大鼠。2.制作模型：(1)ICH對照組：采用立體定向注射技術,向大鼠右側尾狀核注入自體全血50μl；(2)假手術組：只進行手術過程,不注入自體全血；(3)Hx去除組：斷尾取血 1ml,采用親和層析法去除Hx,向大鼠右側尾狀核注入去除Hx后的自體全血50μl；(4)Hx干預組：斷尾取血50μl,向大鼠右側尾狀核注入外加1μl (5μg/μl)Hx后的自體全血50μl。3.術后2h按照Bederson評定方法進行模型成

3、功評價；采用Garcia方法對各時間點進行神經功能障礙評分；采用干濕法測定各時間點血腫周圍腦組織含水量；采用分光光度法檢測血腫中He、CO、鐵離子、非結合膽紅素(UCB)含量變化；采用黃嘌呤氧化酶法測定超氧化物岐化酶(SOD)活力,硫代巴比妥酸法測定丙二醛(MDA)含量；采用放射免疫法測定炎性因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)含量；光鏡觀察各時間點ICH后血腫周圍腦組織HE染色和免疫組織化學染色變化；采用雙評半定量法進行神經功能障

4、礙評分；數 據結果采用SPSS13.0進行統(tǒng)計分析。結果：1.神經功能障礙評分：假手術組各時間點神經功能障礙評分未見顯著性差異(P>0.05)；ICH對照組、Hx去除組、Hx干預組在1d~21d各時間點神經功能評分低顯著低于假手術組(P<0.05)；Hx去除組在術后3d~21d各時間點神經功能評分顯著低于ICH對照組(P<0.05)；Hx干預組在術后3d~21d各時間點神經功能障礙評分顯著高于ICH對照組(P<0.05)。2.血腫周圍腦

5、組織含水量：假手術組在術后各時間點腦組織含水量未見顯著性差異(P>0.05)；ICH對照組、Hx去除組和Hx干預組術后3d~21d腦組織含水量顯著高于各相應時間點的假手術組(P<0.05)；Hx去除組在術后3d~21d組織含水量顯著高于ICH對照組(P<0.05)；Hx干預組在術后3d~21d各時間點腦組織含水量顯著低于ICH對照組(P<0.05)。3.血腫周圍腦組織IL-1β、IL-6、TNF-α含量變化：假手術組術后各時間點IL-1

6、β、IL-6、TNF-α含量未見顯著性差異(P>0.05)；ICH對照組、Hx去除組和Hx干預組術后1d~21d的IL-1β、IL-6、TNF-α含量顯著高于假手術組(P<0.05)；Hx去除組術后1d~21d的IL-1β、IL-6、TNF-α含量顯著高于ICH對照組(P<0.05)；Hx干預組術后1d~21d的IL-1β、IL-6、TNF-α含量顯著低于ICH對照組(P<0.05)。4.腦組織SOD活力、MDA含量變化：4.1 SOD

7、活力變化：假手術組在術后各時間點未見顯著性差異(P>0.05)；ICH對照組、Hx去除組、Hx干預組SOD活力在術后1d~21d顯著低于相應時間點的假手術組(P<0.05)；Hx去除組在術后1d~21d各時間點腦組織SOD活力顯著低于相應時間點的ICH對照組(P<0.05)；Hx干預組在1d~21d腦組織SOD活力顯著高于ICH對照組(P<0.05)。4.2 MDA含量變化：假手術組術后各時間點腦組織MDA含量未見顯著性差異(P>0.0

8、5)；ICH對照組、Hx去除組、Hx干預組在術后1d~21d腦組織MDA含量顯著高于假手術組(P<0.05)；Hx去除組在術后1d~21d各時間點腦組織MDA含量顯著高于ICH對照組(P<0.05)；Hx干預組在術后1d~21d各時間點腦組織MDA含量顯著低于ICH對照組(P<0.05)。5.血腫內He及代謝產物(CO、Fe、UCB)含量：假手術組術后1d~21d 各時間點He及代謝產物含量未見顯著性差異(P>0.05)；ICH對照組、

9、Hx去除組和Hx干預組術后3d~21d各時間點He及代謝產物含量顯著高于假手術組(P<0.05)；Hx去除組術后3d~21d各時間點He及代謝產物含量顯著高于ICH對照組(P<0.05)；Hx干預組術后3d~21d各時間點血腫內He及代謝產物含量顯著低于相應時間點的ICH對照組(P<0.05)。6.HE染色、免疫組織化學光鏡觀察結果：假手術組術后腦組織切片HE染色未見明顯病理改變；ICH對照組、Hx去除組和Hx干預組術后可見腦組織疏松,

10、神經元、膠質細胞、血管內皮細胞腫脹,血腫周圍腦組織淋巴細胞浸潤、膠質細胞增生,還可見少量血管擴張等病理改變；Hx去除組腦組織切片所見上述病理改變程度較ICH對照組重,Hx干預組腦組織切片所見上述病理改變程度較ICH對照組輕。免疫組化顯示假手術組、ICH對照組、Hx去除組、Hx干預組術后各時間點均可以看到陽性細胞,ICH對照組、Hx去除組、Hx干預組陽性細胞數目明顯較假手術組多。7.免疫組織化學評分：假手術組術后各時間點評分未見顯著性差異

11、(P>0.05)；ICH對照組、Hx去除 組、Hx干預組術后3d~21d免疫組織化學評分顯著高于各相應時間點的假手術組(P<0.05)；Hx去除組術后3d~21d評分顯著高于相應時間點的ICH對照組；Hx干預組術后3d~21d免疫組織化學評分顯著低于該時間點的ICH對照組(P<0.05)。8.相關性分析：(1)ICH對照組、Hx去除組和Hx干預組各時間點He及代謝產物含量和IL-1β、IL-6、TNF-α含量及MDA含量與免疫組織化學評

12、分呈負相關,SOD活力與免疫組織化學評分呈正相關；(2)ICH對照組、Hx去除組和Hx干預組神經功能障礙評分與He及代謝產物含量和腦組織含水量及IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA含量呈負相關,與SOD活力、免疫組織化學評分呈正相關；(3)ICH對照組、Hx去除組和Hx干預組各時間點腦組織含水量與He及代謝產物含量和IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA含量呈正相關,與SOD活力、免疫組織化學評分呈負相關。 結論：1.自體全血制作