TLR2基因多態(tài)性與牛結(jié)核病的易感相關(guān)性研究.pdf

1、牛結(jié)核病是由牛分枝桿菌所引起的一種人畜共患的慢性消耗性傳染病，可通過(guò)病畜傳染給人類(lèi)或其他動(dòng)物。牛結(jié)核病的傳染流行嚴(yán)重的影響到畜牧業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展，更嚴(yán)重威脅著人類(lèi)的健康。本課題從分子水平上做牛結(jié)核病的相關(guān)研究，有助于人們控制和消滅牛結(jié)核病，本試驗(yàn)也為以后的相關(guān)研究奠定基礎(chǔ)。
　　本試驗(yàn)將通過(guò)“PPD和 ELISA”方法對(duì)河南省部分地區(qū)（洛陽(yáng)、宜陽(yáng)、蘭考和南陽(yáng)）的部分黃牛進(jìn)行結(jié)核病檢測(cè)，運(yùn)用“PCR和DNA測(cè)序”的方法并結(jié)合統(tǒng)計(jì)學(xué)軟

2、件分析，檢測(cè)黃牛 TLR2完整編碼區(qū) SNP位點(diǎn)與牛結(jié)核病發(fā)生的關(guān)聯(lián)性，探討這些 SNP影響牛結(jié)核病易感性的分子機(jī)理。本試驗(yàn)對(duì)區(qū)分結(jié)核易感高風(fēng)險(xiǎn)牛群以及深入理解牛結(jié)核的發(fā)病機(jī)理具有重要意義。同時(shí)，也為牛結(jié)核病的防制和牛的遺傳育種提供新思路。
　　1.運(yùn)用“PPD和ELISA”方法對(duì)黃牛進(jìn)行結(jié)核病檢測(cè)。
　　對(duì)河南部分地區(qū)（洛陽(yáng)市、宜陽(yáng)縣、蘭考縣以及南陽(yáng)市）選定的382頭黃牛進(jìn)行結(jié)核菌素變態(tài)反應(yīng)(PPD)，結(jié)果顯示，PPD檢測(cè)

3、出陽(yáng)性病例11頭（其中疑似病例2頭），占2.36％。洛陽(yáng)、宜陽(yáng)、蘭考、南陽(yáng)這四個(gè)地區(qū)的檢測(cè)結(jié)果均發(fā)現(xiàn)有陽(yáng)性病例，陽(yáng)性率分別為1.89%、2.35%、2.65%和2.29%，蘭考地區(qū)黃牛結(jié)核病陽(yáng)性率最高，為2.65%，洛陽(yáng)地區(qū)黃牛結(jié)核病陽(yáng)性率最低，為1.89%。對(duì)這些地區(qū)233份黃牛血液樣本進(jìn)行γ干擾素(ELISA)檢測(cè)，檢測(cè)出陽(yáng)性病例3頭，占1.29%。對(duì)156例黃牛做 PPD和 ELISA雙重檢測(cè)，結(jié)果呈雙陽(yáng)性的病例2頭，洛陽(yáng)和南陽(yáng)各

4、有一例，占檢測(cè)總數(shù)的1.28%。
　　2.根據(jù)GenBank中發(fā)表的牛TLR2基因序列設(shè)計(jì)引物，通過(guò)PCR方法對(duì)黃牛的TLR2基因進(jìn)行分段擴(kuò)增并測(cè)序。
　　測(cè)序得到包含TLR2完整編碼區(qū)以及5’端和3’端非編碼區(qū)的2399bp的全序列。序列分析結(jié)果表明，黃牛 TLR2基因開(kāi)放閱讀框全長(zhǎng)2355bp，共編碼784個(gè)氨基酸。黃牛的 TLR2基因編碼區(qū)與荷斯坦牛的相比發(fā)生了16個(gè)堿基突變，其中9個(gè)發(fā)生在胞外區(qū)，2個(gè)發(fā)生在跨膜區(qū)，5

5、個(gè)發(fā)生在胞內(nèi)區(qū)。與GenBank上已發(fā)表的其它動(dòng)物TLR2基因參考序列進(jìn)行比較，結(jié)果顯示黃牛與荷斯坦牛、野牛、水牛、山羊、綿羊、豬、大猩猩和人的同源性分別為99.3%、99.3%、98.0%、96.3%、95.5%、85.4%、83.2%、83.1%。TLR2 N’末端存在信號(hào)肽且可能在21位氨基酸處存在裂解位點(diǎn)，蛋白分子結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè) TLR2蛋白含1個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域。
　　3.結(jié)合統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件檢測(cè)60頭健康黃牛和26頭結(jié)核病陽(yáng)性黃牛 TL