病毒及質(zhì)粒DNA刺激后小鼠肌細胞內(nèi)IFN-β與PD-31的表達情況.pdf

1、目的:自1798年發(fā)現(xiàn)天花疫苗以來，人類已經(jīng)研制出上千種疫苗用來預防和控制各種疾病。傳統(tǒng)的疫苗包括減毒活疫苗、滅活疫苗、類毒素和亞單位疫苗。雖然這些疫苗的研發(fā)在很多疾病的預防和控制中已經(jīng)取得了很大的成就，但是傳統(tǒng)的疫苗也存在著死疫苗滅活不全和活疫苗毒力恢復等缺點，并且在許多胞內(nèi)寄生病原的疫苗研發(fā)上這些途徑表現(xiàn)出了很大的限制性。因此能夠研制出更安全、有效、廉價并且易于推廣的新型疫苗來彌補傳統(tǒng)疫苗的缺陷是人們所面臨的又一個新的挑戰(zhàn)。隨著DN

2、A重組技術的出現(xiàn)和成熟，利用基因工程開發(fā)新疫苗是當前解決這些問題的最好途徑。
　　基因工程疫苗是用分子生物學技術對病原微生物的基因組進行改造，以降低其致病性，提高其免疫原性，或者將病原微生物基因組中的一個或多個對防病治病有用的基因克隆到無毒的原核或真核表達載體上制成疫苗，接種動物產(chǎn)生免疫力和抵抗力，達到防制傳染病的目的。核酸疫苗又名基因疫苗或DNA疫苗，是基因疫苗的一種。
　　肌肉注射是DNA疫苗的常用接種方式。骨骼肌是機體

3、最大的細胞群，也是接種DNA疫苗的常用部位。骨骼肌接種疫苗后，其編碼的蛋白質(zhì)由多種細胞表達也包括骨骼肌細胞在內(nèi)。如一些專職抗原提呈細胞可直接被轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)移至引流淋巴結(jié)并始動免疫應答，樹突狀細胞則可通過交叉抗原提呈途徑將非免疫活性細胞產(chǎn)生的抗原提呈給免疫活性細胞誘導免疫應答。而肌細胞在DNA免疫中的作用在已有的實驗研究結(jié)果中存在差異，一些研究發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染的肌細胞MHCⅠ類分子和B7-1表達上調(diào)，認為它可能在維持專職抗原提呈細胞始動的免疫應答的程度

4、和持續(xù)時間上起作用，而另一些研究則表明肌細胞表達的抗原導致的是CD8+T細胞的耐受。因此，總體來說肌細胞在DNA免疫中的作用仍有待我們進行更深入的研究和探討。
　　PD-1是負性調(diào)節(jié)因子，其配體為PD-L1和PD-L2。PD-L1可在專職抗原提呈細胞、非專職抗原提呈細胞及肌細胞表達。而PD-L2只在樹突狀細胞和巨噬細胞上呈誘導表達。PD-1/PD-L1為負性免疫調(diào)節(jié)信號通路，在很多慢性疾病感染過程中PD-1在特異性免疫活性細胞上高

5、表達，并且使之功能失活，這說明肌細胞在DNA疫苗免疫后，一方面通過表達抗原通過交叉抗原提呈途徑將抗原肽提呈給免疫活性細胞，誘導免疫應答。另一方面可能在建立自我保護的過程中提供負性信號抑制免疫應答。這可能是造成質(zhì)粒DNA疫苗免疫保護作用不高的原因之一。
　　基于上述考慮，本實驗以小鼠肌細胞為研究對象，用質(zhì)粒免疫小鼠，以觀察小鼠肌細胞內(nèi)相關因子PD-L1，CD80的變化情況，以探討其在基因疫苗免疫中的作用及意義，為提高DNA疫苗的免疫

6、保護作用開辟新途徑。
　　方法:(1)質(zhì)粒免疫小鼠肌細胞:體重20g左右的C57BL/6小鼠，股四頭肌肌肉注射質(zhì)粒pcDNA3/VP-1(100ug/只)。(2)Trizol提取總RNA:分別在1天、3天、5天、7天提取總RNA，以DEPC水處理組作為正常對照組，進行Real Time PCR。
　　結(jié)果:(1)用PCDNA3.0/VPl免疫小鼠后，Real Time PCR的結(jié)果顯示實驗組PD-L1的mRNA表達在3天的時

7、候達到高峰，5天、7天時開始緩慢下降;實驗組CD80的mRNA表達在3天時達到高峰，其余時間都維持在較低的水平;對照組的PD-L1和CD80則普遍維持在較實驗組低的水平;對照組的CD80水平較PD-L1高。
　　結(jié)論:(1)質(zhì)粒DNA免疫C57BL/6小鼠肌細胞后使得小鼠肌細胞內(nèi)的PD-L1及CD80 mRNA表達出現(xiàn)波動性的變化。(2)與對照組相比，實驗組的PD-L1及CD80的mRNA表達普遍上調(diào)。(3)正常肌肉組織內(nèi)也構成性