柑桔檸檬苦素、諾米林、吖啶酮的檢測及相關含量與生物活性研究.pdf

1、以胡柚(C. changshanensis)、柚(C. grandis)、溫州蜜柑(C.unshiu)和椏柑(C. reticulata)的果實、根、枝以及葉片等不同器官和組織為試驗材料，改進并建立了檸檬苦素類化合物和吖啶酮生物堿的檢測與提取方法，研究了不同柑桔的不同發(fā)育階段、不同器官和組織中檸檬苦素和諾米林的含量變化，檢測了不同柑桔果實和根粗提物的抗氧化活性及柚果實囊衣檸檬苦素和諾米林粗結晶的抗氧化和抗菌活性。主要結果如下：

2、建立了一個簡單、方便、高效的柑桔檸檬苦素和諾米林檢測提取方法。TLC與HPLC兩種方法相結合可有效地對柑桔檸檬苦素和諾米林進行定性和定量檢測。HPLC的檢測體系為：檢測波長210 nm，色譜柱為C<,18>柱，甲醇：乙腈：磷酸緩沖液(pH=3.5)=10∶40∶39作為流動相；檸檬苦素和諾米林的RSD(n=5)分別為6.48和2.90％，檢測限(S/N=3)均為0.03 μg/g。柑桔檸檬苦素和諾米林的提取采用二氯甲烷為提取液，50℃水

3、浴提取60 min，檸檬苦素和諾米林的回收率分別可達90.45和91.09％。 根據(jù)9(10H)吖啶酮結構熒光特性建立的HPLC檢測條件為：激發(fā)波長和發(fā)射波長分別為395和435 nm，色譜柱為C<,18>柱，以去離予水(A)和甲醇(B)為流動相采用梯度洗脫的方法。該檢測體系操作簡單，靈敏度高，穩(wěn)定性好，得到的檢測限(S/N=3)為0.67 ng/g，在0.25-4.00μg/mL濃度范圍內RSD(n=5)為1.29-2.85％

4、。柑桔9(10H)吖啶酮提取的優(yōu)化體系采用乙醇為提取液，在頻率和功率分別為26 kHz和500 W的條件下超聲提取60 min(30℃)，得到9(10H)吖啶酮的回收率在97.12-101.56％范圍內。 在果實發(fā)育過程中，不同柑桔果實的油胞層、白皮層、囊衣和汁胞四種組織中檸檬苦素和諾米林的含量變化總體都呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢；檸檬苦素在椪柑油胞層和胡柚囊衣中的最高含量分別達到1.53和3.52 mg/g，諾米林在浙江大學博士學

5、位論文：柑桔檸檬苦素、諾米林、吖啶酮的檢測及相關含量與生物活性研究柚油胞層和胡柚囊衣中的最高含量分別達到2.82和2.92 mg/g；柚白皮層中的檸檬苦素和諾米林的含量在發(fā)育過程中保持較低的水平，始終分別低于0.09和0.08 mg/g；在成熟柚果實的囊衣中，檸檬苦素和諾米林含量呈現(xiàn)回升的現(xiàn)象，含量由采前3、w的0.0001和0.06 mg/g分別回升到了采收時的0.42和0.51mg/g。對于相桔不同器官的研究表明，檸檬苦素和諾米林在

6、柑桔的根中大量積累，二者總含量高于同期的果實、葉片和枝中的含量，在椏柑的須根中檸檬苦素和諾米林的總含量達到2.56 mg/g，同期果實、葉片和枝的含量分別為1.35、0.64和0.36 mg/g。 柚果實囊衣提取的檸檬苦素和諾米林粗品的抗氧化活性研究結果表明，粗品的抗氧化活性是等量Vc的10.34倍，四個品種柑桔根中檸檬苦素和諾米林粗提物的抗氧化活性是等量Vc的12.59-17.21倍。 柚果實囊衣提取的檸檬苦素和諾米林

7、粗結晶對細菌和霉菌生長有不同程度的抑制效應。該粗結晶對青霉和黑曲霉的抑菌圈直徑分別為2.09和2.25cm(設定的對照分別為1.26和1.25cm)，但對細菌抑制效應不明顯，抑菌圈直徑分別為1.27和1.28 cm(設定的對照分別為1.27和1.26 cm)。 柑桔檸檬苦素和諾米林的含量和生物活性變化均呈現(xiàn)遺傳、發(fā)育階段、器官和組織的多樣性。簡便、穩(wěn)定的柑桔9(10H)吖啶酮檢測與提取體系建立，為進一步開展柑桔吖啶酮生物堿的含量