卡巴膽堿后處理對人胃黏膜上皮細胞缺氧-復(fù)氧損傷的保護作用及其機制研究.pdf

1、目的：探討卡巴膽堿后處理對人胃黏膜上皮細胞缺氧/復(fù)氧損傷的保護作用并初步探討其機制。
　　方法：體外培養(yǎng)人胃黏膜上皮細胞系(h-GES-1)，建立胃缺氧/復(fù)氧(hypoxia/reoxygenation，H/R)損傷模型。實驗分組如下:正常對照組(N)、2h缺氧/8h復(fù)氧組(H/R)、DMSO溶劑后處理對照組（V-P）、10-4 mol/L卡巴膽堿后處理組(CAR-P)、M受體拮抗劑atropine+卡巴膽堿后處理組（A+CAR-

2、P）、辣椒素受體拮抗劑capsazepine+卡巴膽堿后處理組(C+CAR-P)和ERK通路阻滯劑PD98059+卡巴膽堿后處理組(PD+CAR-P)。采用MTT法檢測細胞存活率，Hoechst33258熒光染色觀察凋亡細胞核的形態(tài)學(xué)變化，PI雙染流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡百分率，可見光分光光度法測定胞漿乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenate，LDH)漏出量，免疫細胞化學(xué)法檢測辣椒素受體的亞型1(vanilloid rece

3、ptor subtypel，VR1)及降鈣素基因相關(guān)肽(calcitonin gene-related peptide，CGRP)的表達，免疫印跡法測定胞漿Bcl-2、Bax、磷酸化細胞外信號轉(zhuǎn)導(dǎo)激酶(phosphorylative extracellular signal-regulatedkinase，p-ERK)的表達。
　　結(jié)果：根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果，指定缺氧2h/復(fù)氧8h為隨后實驗中的缺氧/復(fù)氧模型，10-4 mol/L為本實

4、驗中卡巴膽堿的用藥劑量。實驗結(jié)果如下:(1)與H/R組比較，CAR-P組的細胞存活率升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);細胞凋亡率、陽性凋亡細胞數(shù)目及LDH漏出量減少(P＜0.05);VR1、CGRP、Bcl-2及p-ERK表達上調(diào)，Bax表達下調(diào)(P＜0.05);差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義。提示卡巴膽堿后處理對缺氧/復(fù)氧誘導(dǎo)的h-GES-1細胞損傷具有保護作用。(2)與CAR-P組比較，A+CAR-P、C+CAR-P及PD+CAR-P

5、組細胞存活率降低(P＜0.05);細胞凋亡率、陽性凋亡細胞數(shù)目及LDH漏出量增多(P＜0.05);VR1、CGRP、Bcl-2及p-ERK表達下調(diào)，Bax表達上調(diào)(P＜0.05);差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義。提示M受體拮抗劑atropine(A)、辣椒素受體拮抗劑capsazepine(C)、ERK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路阻斷劑PD98059(PD)能夠消除卡巴膽堿后處理的保護效應(yīng)。
　　結(jié)論：1.卡巴膽堿后處理能夠明顯減輕缺氧/復(fù)氧誘導(dǎo)的h-GE