利用激光顯微切割聯合質譜蛋白質組學鑒定系統(tǒng)性淀粉樣變類型.pdf

1、學校代碼：10023學號：200601100利用激光顯微切割聯合質譜蛋白質組學鑒定系統(tǒng)性淀粉樣變類型專業(yè)年級：北京協(xié)和醫(yī)學院臨床醫(yī)學專業(yè)06級姓名：沈愷妮導師：周道斌(教授)李劍(副教授)北京協(xié)和醫(yī)學院臨床學院(北京協(xié)和醫(yī)院)血液內科完成日期：2014年6月摘要背景及目的：福爾馬林固定石蠟包埋(FFPE)標本結合蛋白質組學技術可以利用院內豐富的病理組織資源進行研究，但目前尚無標準的蛋白提取策略。我們應用當前五種常用的蛋白提取液，對大鼠不

2、同臟器的FFPE微切標本進行蛋白組成分析，從而確定出最佳的能用于后續(xù)淀粉樣變質譜分型的蛋白提取液。淀粉樣變是由致淀粉樣變蛋白在細胞外異常沉積所導致的一組疾病，不同亞型的發(fā)病機制、疾病進程、治療手段及預后均有顯著差異，因而準確的系統(tǒng)性淀粉樣變分型是疾病治療的先決條件。由于抗體類型有限、標本處理后抗原表位丟失和雜質蛋白干擾等因素，傳統(tǒng)的免疫組化法(IHC)診斷淀粉樣變亞型并不理想。以質譜為基礎的蛋白質組學手段，通過鑒定病灶部位的全部蛋白類型

3、，并根據豐度高低判斷致淀粉樣變蛋白種類，從而實現亞型鑒定已經成為新的診斷方法。在本研究中，我們試圖探討利用激光顯微切割聯合質譜蛋白質組學(LMD／MS)方法對系統(tǒng)性淀粉樣變進行分型的可行性，比較質譜診斷與免疫固定電泳(IFE)、血清游離輕鏈(FLC)診斷的準確性差異，以及質譜在不同組織類型中分型的成功率。方法：應用含有Zwittergem316、SDS、PEG20000、尿素的四種蛋白裂解液及FFPEFASP蛋白提取試劑盒對大鼠腦、心臟

4、、腎臟、肝臟及肺組織FFPE顯微切割標本進行蛋白提取，根據鑒定多肽數、蛋白數、譜圖數、蛋白豐度確定出最優(yōu)裂解液并用于淀粉樣變質譜分型。收集北京協(xié)和醫(yī)院2000年1月至2014年5月期間病理確診為系統(tǒng)性淀粉樣變的133例患者的FFPE病理標本。切片行剛果紅染色后，利用LMD收集染色陽性區(qū)域組織。選取最佳裂解液進行蛋白提取后行質譜分析，根據豐度最高的致淀粉樣變蛋白確定淀粉樣變亞型。結果：在微切標本中，含有ZwiRergent316的裂解液在