抑制mTOR通路在常氧及缺氧條件下對骨肉瘤細胞表型和生長相關分子的影響.pdf

1、背景：抑制哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mammaliantargetofrapamycin,mTOR)通路能抑制骨肉瘤活動力和降低肺轉移率,但前期臨床試驗發(fā)現mTOR通路抑制劑單藥治療在骨肉瘤患者中的效果不理想。缺氧可影響mTOR的活性,而mTOR活性被抑制時可影響細胞內多種激酶通路的活性。在不同的氧濃度下,抑制mTOR通路可能產生了復雜的生物學效應。
　　目的：及方法選取人骨肉瘤細胞株MG63細胞,在常氧和缺氧下,采用雷帕霉素(ra

2、pamycin,RAPA)行mTOR抑制,觀察與腫瘤表型相關的核干細胞因子(nucleostemin,NS),與生長相關的環(huán)磷酸腺苷反應元件結合蛋白(cAMP-dependentresponsiveprotein,CREB)和血管內皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)的變化。
　　結果：常氧和缺氧下,與人成骨細胞株hFOB1.19細胞相比,MG63細胞的mTOR活性較高;相同濃度的

3、RAPA在相同時間下對MG63細胞的mTOR活性抑制效果相同。常氧條件下,mTOR抑制通過增強蛋白激酶B(proteinkinaseB,Akt)的核轉位在轉錄和翻譯水平上調了NS的表達;Akt抑制劑wortmannin預處理逆轉了RAPA對NS的上調。缺氧通過增強Akt的活性上調了NS表達;mTOR抑制在缺氧下對Akt的活性無影響,因此對缺氧上調NS的效應也無影響。常氧條件下,mTOR抑制通過細胞外信號調節(jié)激酶(extracellula

4、r-signalregulatedkinase,ERK)-蛋白激酶A(cAMP-dependentkinase,PKA)通路上調了CREB的磷酸化(即phosphorlatedCREB,pCREB)和VEGF的表達。ERK抑制劑U0126預處理不僅逆轉了mTOR抑制對pCREB和VEGF的上調效應,也降低了mTOR抑制下的細胞相對增值率。而PKA抑制劑H89預處理雖也下調pCREB和VEGF,但使Akt活性增加,因此并未降低細胞相對增值