阿薩希毛孢子菌氟康唑耐藥機制的蛋白質組學研究.pdf

1、研究背景:阿薩希毛孢子菌作為常見病原真菌（白念珠菌、煙曲霉、隱球菌）之外的又一個重要的毒力較強的條件致病性真菌，播散性毛孢子菌感染的病死率高達50-80％。臨床及實驗室研究表明唑類藥物具有較好的體內外抗阿薩希毛孢子菌活性，但隨著臨床唑類藥物（特別是氟康唑）的廣泛使用，其對唑類藥物耐藥的報道逐漸增多。
　　目的:尋找阿薩希毛孢子菌敏感株與相應氟康唑誘導耐藥株在氟康唑作用前后的差異蛋白，探尋該菌對氟康唑耐藥的可能機制。
　　材料

2、與方法:
　　1.選取氟康唑敏感的臨床株(CBS2479、CBS8904)進行氟康唑體外誘導耐藥，獲得耐藥表型穩(wěn)定的耐藥株2479R、8904R;
　　2.iTRAQ多重化學標記-LC-MS質譜分析CBS2479和2479R，CBS8904和8904R在氟康唑作用前后蛋白表達差異;
　　3.應用生物信息學分析手段，對得到的蛋白質組學研究數(shù)據(jù)結果，從蛋白質功能、通路及網(wǎng)絡層面篩選耐藥相關（細胞膜、離子通道、酶活性等功能）

3、差異蛋白質;
　　4根據(jù)生物信息學分析的結果，綜合文獻分析，推測與阿薩希毛孢子菌唑類耐藥機制可能相關的差異蛋白。
　　結果:
　　1.體外誘導獲得阿薩希毛孢子菌穩(wěn)定氟康唑耐藥株;
　　2.iTRAQ多重化學標記-LC-MS質譜分析得到CBS2479組質譜，鑒定分析出77320個質譜，其中肽段30682個，唯一肽段26847，以及7174個蛋白點;CBS8904組質譜，鑒定分析出35653個質譜，其中肽段12746

4、個，唯一肽段12022，以及4585個蛋白點;
　　3.CBS8904組生物信息學分析結果:以1.5倍作為差異表達蛋白質篩選的條件，CBS8904與誘導耐藥菌株8904R相比，差異表達蛋白68個，其中上調及下調蛋白各34個;CBS8904氟康唑作用后發(fā)現(xiàn)，差異表達蛋白33個，上調蛋白9個，下調蛋白24個;CBS8904和8904R在氟康唑作用后差異表達蛋白38個，上調蛋白31個，下調蛋白7個;其中參與類固醇代謝的蛋白Erg2、Er

5、g4、Erg5、Erg7、Erg11、Erg26，參與細胞應激反應蛋白Ste12、TOR1、DDR48、HSP70與Calcineurin相關蛋白與阿薩希毛孢子菌的耐藥機制相關。
　　4.CBS2479組生物信息學分析結果:以以1.5倍作為差異表達蛋白質篩選的條件，CBS2479與誘導耐藥菌株2479R相比，差異表達蛋白167個，其中上調蛋白91個，下調蛋白個;CBS2479氟康唑作用后，差異表達蛋白55個，上調蛋白32個，下調蛋

6、白23個;CBS2479和2479R在氟康唑作用后差異表達蛋白159個，上調蛋白78個，下調蛋白81個;其中參與類固醇代謝的蛋白Erg4、Erg5、Erg6、Erg7、Erg11、Erg25、Frg26，細胞應激反應蛋白DDR48、calcineurin相關蛋白、HSP與阿薩希毛孢子菌的耐藥機制相關。
　　結論:
　　1.體外誘導阿薩希毛孢子菌可以獲得穩(wěn)定的阿薩希毛孢子菌耐藥株，并用于阿薩希毛孢子菌的耐藥研究;
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