TLR-4-NF-κB信號通路在小鼠心肌缺血再灌注損傷中的作用.pdf

1、目的:
　　 本實驗通過建立兩種類型的小鼠心肌缺血再灌注損傷的動物模型，比較TLR-4突變小鼠（C3H/Hej小鼠）和野生型小鼠（C57BL/6小鼠）在心肌缺血再灌注損傷之后，心肌缺血及梗死面積，心肌組織中丙二醛、超氧化物歧化酶、髓過氧化物酶活性，檢測血清中部分細胞因子，免疫組化法觀察缺血心肌的NF-κB表達情況以及測定缺血心肌組織中TLR-4蛋白表達水平，來探討TLR-4/NF-κB信號轉導通路在心肌缺血再灌注損傷中的作用。<

2、br>　　 方法:
　　 雄性TLR-4突變小鼠（C3H/Hej小鼠）和野生型小鼠（C57BL/6小鼠）各40只，每一類小鼠隨機分為假手術組(Sham)以及缺血再灌注手術組(IR)，假手術組左冠狀動脈前降支僅穿線不結扎，缺血再灌注手術組結扎左冠狀動脈前降支制備心肌缺血再灌注動物模型（結扎30min，再灌注120min）。實驗結束后，迅速摘取心肌，用TTC染色法測定心肌缺血及梗死面積，取心肌標本行HE染色觀察形態(tài)學改變，測定心肌

3、組織丙二醛(MDA)、髓過氧化物酶(MPO)以及超氧化物歧化酶(SOD)活性，ELISA法檢測血清TNF-α、IL-1、IL-6、MCP-1的濃度，免疫組織化學染色法檢測心肌組織NF-κB的表達，WesternBlotting法測定缺
　　 血心肌組織中TLR-4蛋白的表達水平。對實驗數據采用SPSS17.0統(tǒng)計分析，數據采用均數±標準差((x)±s)表示，實驗所得數據進行獨立樣本t檢驗，以P＜0.05定義為有統(tǒng)計學意義。

4、>　　 結果:
　　 1.心電圖變化兩組IR的小鼠心電圖ST段在缺血30min上升達到高峰，再灌注120min后逐漸回落至缺血前水平。
　　 2.心肌缺血及梗死面積測定兩類小鼠的Sham組均無明顯心肌缺血，C3H/Hej的IR組小鼠心肌缺血及梗死面積較C57BL/6的IR組有所減輕(P＜0.05)。
　　 3.心肌MDA、MPO及SOD活性心肌MDA含量在缺血再灌注后呈現(xiàn)上升趨勢，SOD含量呈現(xiàn)下降趨勢，C3H

5、/Hej的IR組心肌MDA比C57BL/6的IR組上升程度低(P＜0.05)、SOD下降趨勢也較后者幅度?。≒＜0.05），MPO在心肌缺血再灌注后上升，且C3H/Hej的IR組上升程度弱于C57BL/6的IR組(P＜0.05)。
　　 4.血清中TNF-α、IL-1、IL-6、MCP-1濃度測定心肌缺血再灌注后血清中TNF-α、IL-1、IL-6、MCP-1呈現(xiàn)上升趨勢，C3H/Hej組及C57BL/6組的IR組與Sham組比

6、較均呈現(xiàn)上升趨勢，差異顯著（P均＜0.05），且在C3H/Hej的IR組上升不及C57BL/6的IR組(P＜0.05)。
　　 5.免疫組織化學染色法檢測心肌組織NF-κB的表達C3H/Hej的IR組表達弱于C57BL/6的IR組。
　　 6.檢測缺血心肌組織中TLR-4表達在心肌缺血后表達較心肌缺血前都有明顯升高，在C57BL/6小鼠中尤為明顯，上述差別都有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。C3H/Hej小鼠正常心肌中TLR