靶向siRNA阻斷NF-kB信號通路對神經(jīng)母細胞瘤侵襲轉(zhuǎn)移的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的探討重組慢病毒介導siRNA（小干擾RNA）靶向阻斷NF-κB信號通路對人神經(jīng)母細胞瘤QDDQ—NM1細胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響。
　　方法根據(jù)人p65基因序列，設(shè)計針對基因不同靶點的siRNA1、siRNA2、siRNA3、siRNA44條siRNA序列及其對照序列NC，慢病毒介導轉(zhuǎn)染QDDQ—NM1，采用實時熒光定量PCR(RT-PCR)和Western blot法從設(shè)計的4條干擾序列中篩選出siRNA1序列在轉(zhuǎn)染72h干擾效果最

2、好。在轉(zhuǎn)染72h后，采用RT-PCR和Western blot法檢測NF-κB下游基因CXCR4、VEGF mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白表達情況;Transwell小室檢測各組間瘤細胞的轉(zhuǎn)移侵襲能力。
　　結(jié)果轉(zhuǎn)染72h后，PT-PCR顯示，siRNA1-NF-κB CXCR4、VEGFmRNA表達分別為空白對照組0.66倍、0.76倍，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05); Western blot顯示，siRNA1-NF-κ B CXCR4

3、、VEGF蛋白表達分別為空白對照組0.67倍、0.76倍，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05); Transwell小室顯示，Ⅰ（實驗組）、Ⅱ（空載對照組）、Ⅲ（空白對照組）穿過Matrigel膠的細胞數(shù)分別為34.6000±3.9749;45.6000±2.3021;54.8000±2.3874，各組間差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　結(jié)論慢病毒介導的siRNA通過下調(diào)NF-κB下游基因CXCR4、VEGF的表達抑制神經(jīng)母細胞

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