HBV對(duì)細(xì)胞原癌基因、MMPs及TIMPs的影響.pdf

1、HBV(Hepatitis B virus)感染是肝癌(Hepatocellular Carcinoma，HCC)高發(fā)的最主要原因。研究HBV致病機(jī)制的重要途徑就是建立方便有效的HBV感染模型。我們前期的研究建立了能使HBV長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)抗原并復(fù)制的HBV HepG2肝癌細(xì)胞株RHBV-3，同時(shí)獲得了空載體細(xì)胞株RepSal-1[1]。RepSal-1、REP-HBV細(xì)胞株的成功建立為我們研究HBV復(fù)制在整體水平對(duì)細(xì)胞的影響提供了途徑。

2、 細(xì)胞原癌基因(proto-oncogene)與細(xì)胞正常功能有關(guān)，當(dāng)發(fā)生突變或異?；罨瘯r(shí)可引起腫瘤發(fā)生。目前的研究認(rèn)為HBV可能通過DNA整合激活原癌基因(順式活化作用)或其編碼的病毒產(chǎn)物反式活化細(xì)胞基因發(fā)揮致癌作用[2]。 另外，基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrix Metalloproteinases，MMPs)、基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子(tissue inhibitors of metalloproteinases，TIM

3、Ps)與惡性腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系是研究的熱點(diǎn)。有報(bào)道發(fā)現(xiàn)在整合有HBV DNA的Hep3B細(xì)胞及感染HBV的肝癌細(xì)胞中MMP9的表達(dá)增高[3]，而對(duì)TIMPs的影響尚未見報(bào)道。 因此本研究擬通過對(duì)RepSal-1、RHBV-3細(xì)胞株中原癌基因、MMPs及TIMPs基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)及酶活性的分析，初步了解HBV在整體水平上對(duì)癌相關(guān)基因的影響，進(jìn)而探討HBV致肝癌的機(jī)制及其與肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系。 本研究第一部分通過設(shè)計(jì)基因特異

4、性引物，應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR(Real-timeQuantitative Polymerase Chain Reaction，RQ-PCR)初步分析HBV對(duì)HepG2細(xì)胞原癌基因Ras、Jun、Myc、Fos及MMP2、9和TIMP1-4基因轉(zhuǎn)錄的影響，結(jié)果表明HBV復(fù)制促進(jìn)Ras、Jun、Myc、MMP2、9、TIMP1、3基因轉(zhuǎn)錄，抑制TIMP4基因轉(zhuǎn)錄。對(duì)TIMP2無影響。 本研究第二部分通過明膠酶譜檢測(cè)MMP2、9酶活性。