Na-PCP誘導L-02肝細胞氧化應激和線粒體損傷的實驗研究.pdf

1、目的： 在體外試驗系統(tǒng)(in vitro test)，研究有機氯農藥-五氯酚鈉(Pentachlorophenol Sodium，Na-PCP)對L-02肝細胞氧化應激和線粒體損傷，為進一步了解五氯酚鈉的毒作用機制奠定實驗基礎。 方法： 以L-02肝細胞為受試細胞，通姍T試驗檢測不同濃度Na-PCP對L-02肝細胞存活率的影響，選擇細胞存活率為20％～90％的濃度進行后續(xù)實驗。設置1個對照組和5個Na-PCP處理

2、組，即12.812mg/L、19.218mg/L、25.624mg/L、32.030mg/L和38.436mg/L，處理時間為24h，采用化學比色法檢測Na-PCP對L-02肝細胞超氧化物岐化酶(superoxide dismutase，SOD)活力、谷胱甘肽(reduced glutathione，GSH)和丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量的影響：采用熒光分光光度法檢測Na-PCP對L-02肝細胞線粒體膜電位(AΨ

3、m)和線粒體通透性轉運孔(permeability transition pore，PTP)的影響。設置1個對照組和9.609mg/L、12.812mg/L、19.218mg/L三個處理組，處理時間為24h，采用Westem Blotting法檢測Na-PCP對肝細胞p53、細胞色素C和凋亡誘導因子(apoptosis-inducing factor，AIF)的蛋白水平的影響。 結果: 1.在9.609mg/L～38.4

4、36mg/L濃度范圍內，Na-PCP能明顯引起L-02肝細胞存活率的降低，且存在著濃度-反應關系(r=0.978，P<0.01)。 2.與對照組相比，12.812mg/L～38.436mg/L Na-PCP均可導致L-02肝細胞內MDA含量增加(r=0.956，P<0.01)。SOD活性下降(r=0.900，P<0.01)，GSH含量減少(r=0.975，P<0.01)。 3.與對照組比較，在12.812mg/L～38.

5、436mg/L濃度范圍內，隨著Na-PCP染毒濃度的增加，線粒體PTP開放度明顯增大(P<0.01)，且PTP開放度與濃度之間呈現(xiàn)明顯的濃度-反應關系(r=0.997，P<0.01)。 4.與對照組比較，在12.812mg/L～38.436mg/L濃度范圍內，Na-PCP導致熒光吸光度值升高，線粒體膜電位明顯降低(P<0.01)，且膜電位的下降呈濃度依賴性(r=0.795，P<0.01)。 5.經9.609mg/L、12

6、.812mg/L和19.218mg/L Na-PCP處理L-02肝細胞，各組細胞p53、細胞色素C和AIF的蛋白水平明顯高于對照組細胞(P<0.05)。 結論： Na-PCP在9.609mg/L～38.436mg/L的濃度范圍內，能引起L-02肝細胞存活率下降，誘發(fā)氧化損傷，表現(xiàn)為SOD酶活力和GSH含量下降，MDA含量上升。Na-PCP導致肝細胞線粒體膜電位崩潰和通透性轉運孔開放度增大，并使得細胞色素C和AIF從線粒體