應用自體富血小板凝膠治療深Ⅱ度燒傷創(chuàng)面的實驗研究.pdf

1、目的：利用新西蘭兔深Ⅱ度燒傷模型,評價自體富血小板凝膠的療效,通過研究β1整合素、基因物質p63的變化,探討富血小板凝膠對新西蘭白兔燒傷創(chuàng)面愈合的影響,及其對表皮干細胞分化、增殖的促進作用。
　　方法：將45只新西蘭大白兔,雌雄不限,體重2.5~3.0 kg,隨機分為A、B、C三組,每組15只,用電子恒溫電燙儀在大白兔背部對稱兩側建立深Ⅱ度燒傷模型。A組為實驗組用富血小板凝膠覆蓋傷口,B組為對照組用貧血小板凝膠覆蓋傷口,C組為空白

2、組用生理鹽水覆蓋傷口,隔日常規(guī)清創(chuàng)換藥。每組于傷后第1、3、7、14、21天隨機斷頸處死3只白兔,切取背部兩側創(chuàng)面,組織固定、包埋、制作病理切片。以β1整合素和基因物質p63作為表皮干細胞的鑒別標志物,用免疫組織化學法檢測β1整合素和基因物質p63在創(chuàng)面皮膚組織中的分布情況。在光學顯微鏡下觀察切片,每張切片在皮膚層隨機選取個10不連續(xù)的視野,用Axio Vision顯微圖像采集系統(tǒng)拍攝圖片,應用 Image-Pro Plus5.0圖像分

3、析軟件計算每個視野陽性表達的積分光密度值(integral optical density, IOD)
　　結果：1.肉眼觀察新西蘭大白兔動物燒傷模型可見燒傷創(chuàng)面表皮壞死。病理切片證實創(chuàng)面深達真皮深層,為深Ⅱ度燒傷模型,達到進一步實驗要求。2.免疫組化檢測病理切片分為β1整合素、基因物質 p63兩個指標。實驗發(fā)現(xiàn),兩個指標的陽性細胞IOD在富血小板凝膠組、貧血小板凝膠組和生理鹽水組中具有一定的規(guī)律。三組在術后1天陽性細胞IOD均較

4、低,富血小板凝膠組和貧血小板凝膠組在術后7天陽性細胞IOD達到峰值,然后又逐漸降低,生理鹽水對照組在術后14天陽性細胞 IOD達到峰值,然后又逐漸降低。富血小板凝膠組峰值高于生理鹽水對照組和貧血小板凝膠組的峰值。2.1β1整合素:在術后1天,富血小板凝膠組、貧血小板凝膠組、生理鹽水對照組陽性細胞 IOD分別為1076.24±99.85、1074.60±125.44、1074.60±99.703,三組間陽性細胞IOD無明顯差異(P>0.0

5、5);術后第3天各組陽性細胞IOD分別為2045.38±122.70、1858.34±41.94、1614.85±131.44,富血小板凝膠組和貧血小板凝膠組陽性細胞 IOD高于生理鹽水對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01),富血小板凝膠組高于貧血小板凝膠組陽性細胞IOD,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);術后第7天各組陽性細胞 IOD分別為3034.10±63.58、2779.70±99.14、1839.37±55.614,富血小板

6、凝膠組和貧血小板凝膠組陽性細胞 IOD高于生理鹽水對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01),富血小板凝膠組高于貧血小板凝膠組陽性細胞IOD,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);術后第14天各組陽性細胞 IOD分別為1643.97±49.11、004.47±97.15、2421.29±201.54;術后第21天各組陽性細胞IOD分別為805.66±16.52、1182.94±106.88、1169.75±310.21。術后14天和21天富血

7、小板凝膠組和貧血小板凝膠組陽性細胞 IOD低于生理鹽水對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01),富血小板凝膠組陽性細胞 IOD低于貧血小板凝膠組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。2.2基因物質p63:在術后1天,富血小板凝膠組、貧血小板凝膠組、生理鹽水對照組陽性細胞IOD分別為158.99±24.27、143.86±21.73、145.88±26.65,三組間陽性細胞IOD無明顯差異(P>0.05);術后第3天各組陽性細胞IOD分別為3

8、51.69±34.74、322.06±22.32、289.30±35.87,富血小板凝膠組和貧血小板凝膠組陽性細胞IOD高于生理鹽水對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),富血小板凝膠組高于貧血小板凝膠組陽性細胞IOD,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。術后第7天各組陽性細胞IOD分別為967.10±37.35、774.39±56.73、、357.31±34.56,富血小板凝膠組和貧血小板凝膠組陽性細胞 IOD高于生理鹽水對照組,差異

9、有統(tǒng)計學意義(P<0.05),富血小板凝膠組高于貧血小板凝膠組陽性細胞IOD,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。術后第14天各組陽性細胞 IOD分別為478.08±34.79、407.50±17.49、541.69±29.34,術后14天富血小板凝膠組和貧血小板凝膠組陽性細胞 IOD低于生理鹽水對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01),富血小板凝膠組陽性細胞 IOD高于貧血小板凝膠組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);術后第21天各組陽性

10、細胞IOD分別為155.78±16.41、271.64±20.44、359.50±13.10,富血小板凝膠組和貧血小板凝膠組陽性細胞IOD低于生理鹽水對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01),富血小板凝膠組陽性細胞 IOD低于貧血小板凝膠組差異有統(tǒng)計學意義( P<0.01)。2.3β1整合素陽性細胞在主要位于細胞膜,為棕黃色顆粒?；蛭镔|p63素陽性細胞在主要位于細胞核,為棕黃色顆粒。到術后7天A組較其他兩組真皮層皮脂腺和毛囊增多,且大