芪蛭皺肺顆粒對(duì)LPS致炎肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞抗菌肽表達(dá)的影響.pdf

1、目的:本研究對(duì)新生大鼠肺泡II型上皮細(xì)胞(alveolar type II epithelial cell, AT-II)進(jìn)行原代培養(yǎng)與鑒定,通過(guò)芪蛭皺肺顆粒在體外的干預(yù)實(shí)驗(yàn),觀察芪蛭皺肺顆粒對(duì)LPS致炎肺泡II型上皮細(xì)胞中抗菌肽表達(dá)的影響,探討其對(duì)COPD的防治機(jī)制,為COPD的診治提供新的思路和措施,同時(shí)為臨床開發(fā)研究芪蛭皺肺顆粒提供藥效學(xué)基礎(chǔ)。
　　方法:采用酶消化法分離SPF級(jí)新生wistar大鼠的肺泡II型上皮細(xì)胞,進(jìn)行

2、原代培養(yǎng),觀察細(xì)胞形態(tài)及生長(zhǎng)特點(diǎn),采用透射電鏡觀察、HE染色、堿性磷酸酶染色和改良巴氏染色等方法來(lái)鑒定肺泡II型上皮細(xì)胞的特異性細(xì)胞結(jié)構(gòu),并測(cè)定AT-II細(xì)胞純度及活力。在AT-II細(xì)胞順利完成原代培養(yǎng)的前提下,以40μg/ml的LPS刺激AT-II細(xì)胞發(fā)生炎癥反應(yīng),構(gòu)建脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致炎肺泡II型上皮細(xì)胞模型。分別添加高、中、低劑量(200μg/ml、100μg/ml、50μg/ml)的芪蛭皺肺

3、顆粒,培養(yǎng)48小時(shí);檢測(cè)各組細(xì)胞LDH活力、TNF-α和抗菌肽LL-37 mRNA和蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:(1)對(duì)AT-II細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,生長(zhǎng)狀態(tài)良好;經(jīng)過(guò)對(duì)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)與特異性的鑒定,確定AT-II細(xì)胞原代培養(yǎng)成功;
　　(2)當(dāng)LPS濃度從0加至40μg/ml時(shí),細(xì)胞的異常增值率逐漸升高,但當(dāng)LPS濃度為60μg/ml時(shí),引起細(xì)胞急性壞死,因此確定誘導(dǎo)AT-II細(xì)胞炎癥反應(yīng)的LPS最適濃度為40μg/ml;

4、>　　(3)芪蛭皺肺顆粒能夠顯著降低LPS致炎的肺泡II型上皮細(xì)胞的應(yīng)激反應(yīng),其中200μg/ml的芪蛭皺肺顆粒濃度效果最佳;
　　(4)芪蛭皺肺顆粒能顯著降低細(xì)胞的TNF-α濃度(P<0.05),說(shuō)明芪蛭皺肺顆粒能夠顯著降低LPS致炎的肺泡II型上皮細(xì)胞的炎癥反應(yīng);
　　(5)空白組AT-II細(xì)胞的LL-37 mRNA的表達(dá)水平較其他各組明顯較低(P<0.05),而模型對(duì)照組AT-II細(xì)胞的LL-37 mRNA的表達(dá)水平明

5、顯高于芪蛭皺肺顆粒干預(yù)組;
　　(6)空白組AT-II細(xì)胞的LL-37蛋白表達(dá)水平較其他各組明顯較低(P<0.05),而芪蛭皺肺顆粒各干預(yù)組AT-II細(xì)胞的LL-37蛋白表達(dá)水平明顯低于模型對(duì)照組(P<0.05),同時(shí)芪蛭皺肺顆粒高劑量組AT-II細(xì)胞的LL-37蛋白表達(dá)水平明顯低于芪蛭皺肺顆粒低劑量組(P<0.05)。
　　結(jié)論:(1)利用酶消化法對(duì)乳鼠肺組織進(jìn)行分離、培養(yǎng),能夠完成AT-II細(xì)胞的原代培養(yǎng),經(jīng)鑒定,確定A